Əsas Fərq – İsti və Soyuq Tripsizləşdirmə
İsti və Soyuq Tripsizləşdirmə heyvan hüceyrə kultivasiyasında hüceyrələrin enzimatik parçalanmasında istifadə edilən iki üsuldur. İsti və soyuq tripsinizasiya arasındakı əsas fərq, adlardan göründüyü kimi, tripsinin hüceyrə parçalanması üçün əlavə olunduğu temperaturdan asılıdır. İsti tripsinizasiya daha yüksək temperatur şəraitində (36,5 – 37 0C), soyuq tripsinizasiya isə aşağı temperatur şəraitində baş verir.
Heyvan hüceyrələrinin ilkin hüceyrə kultivasiyası prosesində üç əsas üsuldan istifadə olunur və uğurlu olduğu sübut edilmişdir. Üç üsula hüceyrələrin mexaniki parçalanması, hüceyrələrin enzimatik parçalanması və ilkin eksplant üsulu daxildir. Hüceyrələrin enzimatik parçalanması hüceyrələrin təcrid olunmasına gətirib çıxarır və bu, protein parçalayan ferment tripsin tərəfindən həyata keçirilir. Buna görə də bu proses tripsinizasiya kimi tanınır. Tripsinizasiya iki fərqli şəraitdə həyata keçirilə bilər, yəni İsti Tripsinizasiya və Soyuq Tripsinizasiya. İsti tripsinizasiya 36,5 – 37 0C temperaturda isti şəraitdə hüceyrələrin tripsinlə müalicəsi üsuludur. Soyuq tripsinizasiya, daha soyuq şəraitdə, tercihen çox aşağı temperaturu saxlayan buzda baş verən tripsin müalicəsi prosesidir.
İsti Tripsinizasiya nədir?
İlkin hüceyrə mədəniyyəti yaratmaq üçün hüceyrələri təcrid etmək üçün hüceyrə komponentlərini parçalamaq üçün tripsinizasiya edilə bilər. Tripsin zülalın parçalanması fermentidir və tripsinizləşmədə istifadə olunan ferment qarışığı ya xam ekstrakt, ya da təmizlənmiş məhsul ola bilər. Xam ekstraktın tərkibində digər deqradasiyaedici fermentlər olduğu üçün zülal lizisi və hüceyrə parçalanmasında daha effektiv olduğu deyilir.
İsti tripsinizasiya daha yüksək temperatur şəraitində baş verən hüceyrələrin parçalanması üçün ən çox istifadə edilən enzimatik üsuldur. Tripsinizasiya ilə müalicədən əvvəl, istədiyiniz toxuma daha kiçik parçalara doğranır. Asan parçalanma prosesini asanlaşdırır. Daha sonra doğranmış toxuma Dissection Bazal Duz mühiti kimi tanınan xüsusi mühitdə yuyulur.
Yuyulma mərhələsi başa çatdıqdan sonra hüceyrələr tripsin olan aktiv fermenti olan kolbaya çevrilir. Bu texnika isti tripsinizasiya protokolunu nəzərdə tutduğundan, tripsin təxminən dörd saat ərzində təxminən 37 0C temperaturda yerləşdirilir.
Şəkil 01: Tripsin
Protokolun asanlığı və parçalanma prosesini sürətləndirmək üçün sentrifuqa üsullarından istifadə etməklə məzmunlar qarışdırılır və qarışdırılır. Tövsiyə olunan vaxta çatdıqdan sonra hüceyrələr supernatantdan əldə edilə bilər. Supernatantdan əldə edilən hüceyrələr daha sonra müəyyən temperaturda və zamanda inkubasiya edilir.
Soyuq Tripsinizasiya nədir?
Soyuq tripsinizasiya soyuq şəraitdə baş verən tripsinizasiyanın digər növüdür. Bu texnikada doğranmış və yuyulmuş hüceyrələr buz üzərində flakonlara qoyulur və sonra tripsinlə isladılır. Islatma müddəti daha uzundur – təxminən 6 – 24 saat.
İmlatma proseduru başa çatdıqdan sonra tripsin hüceyrə lizatından çıxarılır və toxuma parçaları əlavə olaraq 37 0C-də təxminən 20-30 dəqiqə inkubasiya edilir. Hüceyrələrin parçalanması toxuma qarışığının təkrar pipetlənməsi ilə həyata keçirilir. Bu, hüceyrələrin membrandan ayrılmasına və supernatana gəlməsinə imkan verəcəkdir. Hüceyrələr supernatantda olduqdan sonra onlar inkubasiya edilir və istənilən temperaturda və müddətdə böyüdülür.
Soyuq tripsinizasiya metodunun bir sıra üstünlükləri var
- Hüceyrə zədələnməsi minimuma endirildiyindən canlı hüceyrələrin daha yüksək məhsuldarlığı. Hüceyrə zədələnməsi sentrifuqa addımlarından istifadə edilməməklə minimuma endirilir.
- Çox rahat üsul.
- Daha az zəhmət tələb edir.
Soyuq tripsinizasiya metodunun əsas məhdudiyyəti odur ki, böyük miqdarlar bir halda istifadə edilə bilməz.
İsti və soyuq tripsinizasiya arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Həm İsti, həm də Soyuq Tripsizləşdirmə prosesləri hüceyrələrin parçalanması üçün tripsin fermentindən istifadə edir.
- Həm isti, həm də soyuq tripsinizasiya prosesləri hüceyrələrin parçalanması üçün hüceyrə mədəniyyəti prosedurlarında istifadə olunur.
- Həm İsti, həm də Soyuq Tripsizləşdirmə müalicə prosedurlarında hüceyrələr supernatantdan əldə edilir.
İsti və Soyuq Tripsizləşdirmə Arasındakı Fərq Nədir?
İsti vs Soyuq Tripsizləşdirmə |
|
| İsti tripsinizasiya 36,5 – 37 temperaturda hüceyrələrin tripsinlə müalicəsi üsuludur 0. | Soyuq tripsinizasiya daha soyuq şəraitdə, tercihen buzda çox aşağı temperaturu saxlayaraq həyata keçirilən tripsinlə müalicə prosesidir. |
| Protokol | |
| Doğranmış toxuma parçaları prosedur boyunca davamlı olaraq 37 0C temperaturda saxlanılır. | Doğranmış toxuma parçaları əvvəlcə buz kimi soyuq temperaturda saxlanılır və sonra 37 0 səviyyəsində saxlanılır. |
| Temperatur | |
| İsti tripsinizasiya 36.5 – 37-də baş verir 0 | Soyuq tripsinizasiya buz kimi soyuq temperaturlarda baş verir. |
| İstifadə olunan vaxt | |
| İsti tripsinizasiyanın bütün prosesi (təxminən 4 saat) üçün daha az vaxt tələb olunur. | Soyuq tripsinizasiya üçün daha uzun müddət tələb olunur (təxminən 6 – 24 saat). |
| Canlı Hüceyrələrin Verimi | |
| İsti tripsinizasiyada azdır. | Soyuq tripsinizasiyada yüksək. |
| Sentrifuqadan İstifadə | |
| İsti tripsinizasiyada hüceyrələrin parçalanması üçün sentrifuqasiya tələb olunur. | Soyuq tripsinizasiyada sentrifuqaya ehtiyac yoxdur. |
| Tripsinizasiya üçün ilkin toxuma miqdarı | |
| Daha böyük miqdarda toxuma isti tripsinizasiyada istifadə edilə bilər. | Soyuq tripsinizasiyada daha az miqdarda toxuma istifadə oluna bilər. |
| Hüceyrə Zərərləri | |
| İsti tripsinizasiyada sentrifuqaya görə yüksək. | Soyuq tripsinizasiyaya görə daha az. |
Xülasə – İsti və Soyuq Tripsizləşdirmə
Tripsinizləşdirmə hüceyrə kultivasiyası prosesi zamanı ilkin hüceyrə kulturalarının parçalanması və hazırlanması üçün protein parçalayan ferment tripsin istifadə üsuludur. Prosedur zamanı istifadə olunan temperaturlara əsaslanan tripsinizasiyanın iki əsas üsulu var. Onlar isti və soyuq tripsinizasiyadır. İsti tripsinizasiya 37 0C-də, soyuq tripsinizasiya isə buz kimi soyuq şəraitdə həyata keçirilir. Soyuq tripsinizasiyanın tamamlanması daha uzun vaxt tələb etsə də, bunun canlı hüceyrələrin daha yüksək məhsuldarlığına malik olduğu deyilir. Bu, güclü sentrifuqa addımlarından istifadə etmədiyi üçün soyuq tripsinizasiya zamanı hüceyrə zədələnməsinin minimuma endirilməsi ilə bağlıdır. Bu, isti və soyuq tripsinizasiya arasındakı fərqdir.
