Mikronükleus və kometa analizi arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, mikronükleus analizi mutagenlərə məruz qalma nəticəsində xromosom zədələnməsini yoxlamaq üçün vacibdir, kometa analizi isə ayrı-ayrı hüceyrələrdə ilkin DNT zədələnməsini aşkar etmək üçün vacibdir.
Genotoksisite analizləri mutasiyaların və xromosom anomaliyalarının imkanlarını qiymətləndirməyə kömək edir. Genotoksinlərə kimyəvi maddələr və radiasiya daxildir. Kanserogenlər, mutagenlər və teratogenlər genotoksinlərin əsas kateqoriyalarıdır. Nöqtə mutasiyaları, silinmələr, tək və cüt zəncirli qırılmalar, xromosom aberrasiyaları, mikronükleusların əmələ gəlməsi, DNT təmiri və hüceyrə dövrü qarşılıqlı təsirləri kimi müxtəlif zərərlərə səbəb olurlar. Bu cür şərtlər müxtəlif xəstəliklərə səbəb ola bilər və genotoksiklik analizləri bu şərtlərdən potensial zərərin qarşısını alır. Mikronükleus analizi və kometa analizi genotoksiklik analizləri altında iki üsuldur.
Mikronükleus Təhlili nədir?
Mikronükleus analizi mutagen məruz qalma nəticəsində xromosom zədələnməsini qiymətləndirmək üçün bir analizdir. Mil əmələ gəlməsinə və mikronükleuslara səbəb olan kimyəvi maddələrin yoxlanılmasında vacibdir. Mikronükleus analizi xromosom quruluşuna və funksiyasına müdaxilə edərkən kimyəvi maddələrin sabitliyi haqqında məlumat verir. Bir çox kanserogen mikronükleus testlərində müsbət nəticə verir. Təhlil prosesi kimyəvi müalicədən və mikronükletli hüceyrələrin tezliyinin ölçülməsindən ibarətdir. Mikronükleus hüceyrələrinin sayında anormal artım olarsa, kimyəvi maddənin xromosom zədələnməsinə səbəb olduğu qənaətinə gəlir.
Mikronüvə analizi adətən aktiv bölünən hüceyrələr üzərində aparılır. Buna görə də, hüceyrə bölgüsü nəticəsində əmələ gələn eritrositlər və sümük iliyinin kök hüceyrələri bu cür analizlər üçün ideal namizədlərdir. Onlar daimi və sürətli dövriyyə yaşayırlar. Eritrositlərin həqiqi nüvələri olmadığından, analizin sonunda mikronükletli hüceyrələri daha görünür edir.
Şəkil 01: Mikronükleus Təhlili Müşahidəsi
Mikronükleus analizləri qənaətcil, daha sürətli, rahatdır və həyata keçirmək üçün daha az bacarıq tələb edir. Onlar xromosom aberrasiyalarını etibarlı şəkildə sürətlə əks etdirir və xromosom zədələrini tez qiymətləndirmək üçün son dərəcə faydalıdır. Mikronükleus analizinin xüsusi və çox yönlü növü sitokinez blok mikronükleus sitomu (CBMNcyt) analizidir. Hüceyrələrdə xromosom zədələnməsini və qeyri-sabitliyi ölçmək üçün üstünlük verilən analizdir. Bununla belə, mikronükleus analizindən istifadənin əsas problemi ondan ibarətdir ki, onun müxtəlif növ xromosom aberrasiyalarını təyin edə bilməməsi və analizin mitoz sürətinə və hüceyrə ölümünün nisbətinə təsir göstərərək nəticələrin dəyişməsinə səbəb olur.
Kometa Təhlili nədir?
Tek gel elektroforez analizi kimi də tanınan kometa analizi DNT zədəsini aşkar etmək üçün sadə və həssas bir üsuldur. O, eukaryotik hüceyrələrdə DNT qırılmalarını ölçür və biomonitorinq və genotoksiklik testi üçün standart üsuldur.
Kometa analizi aşağı ərimə nöqtəsi agaroza süspansiyonlarında hüceyrələrin kapsulyasiyasında, neytral və ya qələvi şəraitdə hüceyrələrin lizisində və dayandırılmış parçalanmış hüceyrələrin elektroforezində iştirak edir. Kapsülləmə prosesi zamanı hüceyrələr ərimiş aşağı ərimə nöqtəli agarozada dayandırılır və agaroza onları yerində bərkitmək üçün karbohidrat liflərindən ibarət matrisa əmələ gətirir. Agaroza osmotik neytraldır; buna görə də məhlulların geldən nüfuz etməsinə və onları narahat etmədən və dəyişmədən hüceyrələrə təsir etməsinə imkan verir. Lizis məhlulu yüksək konsentrasiyalı sulu duz məhlulu və yuyucu vasitədir. Bu duz hüceyrənin RNT tərkibini pozarkən hüceyrədəki zülalları və bağlanma nümunələrini pozur. Hüceyrələr məhv edir və bütün zülallar, RNT, sitoplazma və nukleoplazmatik komponentlər, DNT-ni tərk edərək agaroza matrisini pozur və diffuziya edir.
Şəkil 02: Kometa Təhlili
Elektroforez məhlulu qələvi məhluldur, burada DNT ikiqat spiral denatürasiya olunur və nukleoid tək zəncirli olur. Bu proses zamanı şəkilləri təhlil etmək üçün elektrik sahəsi tətbiq edilir. Şəkil təhlili DNT və nukleoid üçün flüoresansın ümumi intensivliyini ölçür və ikisini müqayisə edir. Ümumi quruluş qalan zədələnməmiş DNT-yə uyğun olan dairəvi başı və zədələnmiş DNT üçün quyruğu olan kometə bənzəyir. Daha güclü siqnallara görə quyruq nə qədər parlaq və uzun olarsa, zədələnmə səviyyəsi bir o qədər yüksək olar.
Mikronükleus və Kometa Təhlili Arasındakı oxşarlıqlar nələrdir?
- Mikronükleus və kometa analizi qənaətcil, daha sürətli, rahatdır və daha az bacarıq tələb edir.
- Onlar əsasən DNT üzərində aparılır.
- Hər iki analiz mutasiyaları və xromosom anomaliyalarını qiymətləndirməyə kömək edir.
- Bundan başqa, hər iki texnika proseduru həyata keçirmək üçün kimyəvi maddələrdən istifadə edir.
Mikronükleus və Kometa Təhlili Arasındakı Fərq Nədir?
Mikronükleus analizi mutagenlərə məruz qalma nəticəsində xromosom zədələnməsinin yoxlanılmasında, kometa analizi isə ayrı-ayrı hüceyrələrdə ilkin DNT zədələnməsinin aşkar edilməsində vacibdir. Beləliklə, bu mikronükleus və kometa analizi arasındakı əsas fərqdir. Həmçinin, mikronükleus analizi klastogenliyi və anevogenliyi aşkar etmək üçün yaxşı qurulmuşdur. Kometa analizi hüceyrələrdə ilkin DNT zədələnməsini aşkar etmək üçün genotoksiklik testi kimi istifadə olunur. Üstəlik, mikronükleus analizi kimyəvi maddələrin sabitliyi haqqında məlumat verir, kometa analizi isə tək hüceyrəli gel elektroforezidir.
Aşağıdakı infoqrafika mikronükleus və kometa analizi arasındakı fərqləri yan-yana müqayisə üçün cədvəl şəklində təqdim edir.
Xülasə – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoksisite analizləri mutasiyaların və xromosom anomaliyalarının imkanlarını qiymətləndirməyə kömək edir. Mikronükleus analizi və kometa analizi genotoksiklik testləri altında iki üsuldur. Mikronükleus analizi mutagen məruz qalma nəticəsində xromosom zədələnməsini qiymətləndirir. Kometa analizi DNT zədəsini aşkar etmək üçün sadə və həssas bir üsuldur. Beləliklə, bu mikronükleus və kometa analizi arasındakı əsas fərqdir. Mikronükleus analizi mil əmələ gəlməsinə və mikronükleilərə səbəb olan kimyəvi maddələrin yoxlanılmasında vacibdir. Kometa analizi aşağı ərimə nöqtəsi olan agaroza süspansiyonlarında hüceyrələrin kapsulyasiyasında, neytral və ya qələvi şəraitdə hüceyrələrin lizisində və dayandırılmış parçalanmış hüceyrələrin elektroforezində iştirak edir.
