Əsas Fərq – Keçici və Sabit Transfeksiya
Transfeksiya kimyəvi və ya fiziki üsullarla eukaryotik hüceyrələrin gen transferində iştirak edən bir prosesdir. Transfeksiya keçici transfeksiya və sabit transfeksiya adlı əsas iki növə təsnif edilə bilər. Keçici transfeksiya zamanı maraq geni ev sahibinin genomu ilə inteqrasiya olunmur və müvəqqəti olaraq ev sahibi daxilində qısa müddət ərzində ifadə edilir, sabit transfeksiyada isə maraq geni ev sahibinin genomu ilə inteqrasiya olunur və bir neçə nəsil ərzində uzun müddət saxlanılır.. Bu keçici və sabit transfeksiya arasındakı əsas fərqdir. Hər iki halda transfeksiya uğurlu olur və genlər ifadə edilir.
Keçici Transfeksiya nədir?
Transfeksiya genlərin eukaryotik hüceyrələrə daxil edilməsi üçün mühüm vasitədir. Transfeksiyanın iki növü arasında keçici transfeksiya gen transferində ümumi üsuldur. Bir vektor vasitəsilə yad genlər ev sahibi hüceyrələrin içərisində çevrilir. Xarici DNT ev sahibi hüceyrəyə daxil olduqdan sonra onun iki seçimi var. O, ya ev sahibi genomu ilə inteqrasiya edib replikasiya edə bilər, ya da genomla inteqrasiya etmədən içəridə qala bilər. Keçici transfeksiya, ev sahibi genomuna inteqrasiya etmədən daxil edilmiş genlərin müvəqqəti ifadəsini nümayiş etdirir. Genlər hüceyrə bölünənə qədər kodlanmış proteini ifadə edir və istehsal edir. Lakin inteqrasiya oluna bilmədiyi üçün çoxalıb gələcək nəsillərə daxil ola bilmir. Bu tip transfeksiya qısa müddət ərzində uğurlu olur. Hüceyrə bölünməsi zamanı və ya bəzi digər amillərə görə yad DNT deqradasiyaya məruz qalır. Keçici transfeksiya xarici DNT yüksək qıvrılmış DNT şəklində olduqda göstərilir.
Şəkil 01: Keçici Transfeksiya
Stabil Transfeksiya nədir?
Sabit transfeksiya yad genlərin ev sahibi genomuna uğurlu inteqrasiyasını göstərir. Yad DNT ev sahibi hüceyrənin içərisinə daxil olduqdan sonra yad DNT-nin bir hissəsi ev sahibinin genomu ilə inteqrasiya olunur və onun bir hissəsinə çevrilir. Beləliklə, yad DNT də çoxalır və ev sahibi genom təkrarlandıqda gələcək nəsillərə keçir. Bu tip transfeksiya mürəkkəb və nadirdir. Bununla belə, genomun stabil transfeksiyası sayəsində bu xüsusiyyət bir neçə nəsildən ibarət daha uzun müddət saxlanılır.
Sabit transfeksiya çətin prosesdir və DNT-nin effektiv şəkildə çatdırılmasını və hüceyrənin xarici DNT-nin genomuna daxil olmasını tələb edir. Beləliklə, xətti DNT dairəvi DNT-dən daha stabil transfeksiyaya üstünlük verir. Bununla belə, stabil transfeksiya sürəti təxminən 104 çevrilmiş hüceyrədən biridir. Stabil transfeksiya seçilə bilən markerin kotransfomasiyası və mühitdə süni seçimi həyata keçirməklə müşahidə edilə bilər.
Şəkil 02: Stabil Transfeksiya
Keçici və Stabil Transfeksiya arasındakı fərq nədir?
Transient vs Stabil Transfeksiya |
|
| Xarici DNT ev sahibi genomuna inteqrasiya etmir. | Xarici DNT ev sahibi genomu ilə inteqrasiya edir və onun bir hissəsi olur. |
| Host daxilində Replikasiya | |
| Transient şəkildə transfeksiya edilmiş genlər ev sahibi daxilində təkrarlanmır. Buna görə də genlər gələcək nəsillərə ötürülmür. | Genlər ev sahibi daxilində təkrarlanır və gələcək nəsillərə ötürülür. |
| Gen İfadəsinin müddəti | |
| Genlər sonlu bir müddət üçün ifadə edilir və bundan sonra məhv edilir. | Genlər genomun bir hissəsi olur və uzun müddət ərzində nəsildə ifadə olunur. |
| İstifadə edin | |
| Bu, genlərin və ya gen məhsullarının qısamüddətli ifadəsinin təsirlərini öyrənmək üçün faydalıdır. | Bu, gen ifadələrinin uzunmüddətli təsirlərini öyrənmək üçün faydalıdır. |
| Transfeksiyanın Aşkarlanması | |
| Genlər ifadə edilir və reportyor geni daxil etməklə asanlıqla aşkar edilə bilər. | Sabit transfeksiya seçilə bilən marker daxil etməklə və media üzərində süni seçim vasitəsilə seçməklə asanlıqla aşkarlana bilər. |
| Baş vermə və Proses | |
| Transient transfeksiya adi haldır və icrası mürəkkəb deyil. | Sabit transfeksiya nadir hallarda baş verir və yerinə yetirilməsi mürəkkəbdir. |
| DNT-nin təbiəti | |
| Yüksək qıvrımlı DNT keçici transfeksiya üçün uyğundur. | Xətti DNT stabil transfeksiya üçün uyğundur. |
| Tətbiqlər | |
| Bu, genin yıxılması və ya inhibitor RNT-lərlə susdurulması, kiçik miqyasda protein istehsalı tədqiqatları üçün istifadə olunur | Bu, geniş miqyaslı, uzunmüddətli farmakoloji tədqiqatlar, gen terapiyası, uzunmüddətli genetik tənzimləmə mexanizmləri üzrə tədqiqatlarda protein istehsalı üçün istifadə olunur |
Xülasə – Keçici və Sabit Transfeksiya
Keçici və stabil transfeksiyalar, virus olmayan sistemlər tərəfindən eukaryotik hüceyrələrə ötürülən gen zamanı göstərilən iki növ transfeksiyadır. Transformasiya edilmiş xarici DNT, stabil transfeksiyada ev sahibinin genomu ilə birləşdiyi halda, keçici transfeksiyada ev sahibi genomu ilə inteqrasiya olunmur. Dairəvi qıvrımlı DNT keçici transfeksiya göstərilir, xətti DNT isə sabit transfeksiyaya üstünlük verir. Bu keçici və sabit transfeksiya arasındakı fərqdir. Bununla belə, müvəqqəti transfeksiya stabil transfeksiya ilə müqayisədə daha çox yayılmış və asandır. Lakin ikisindən birinin seçilməsi gen transferinin məqsədindən və tədqiqat layihəsinin müddətindən asılıdır.
