Əsas Fərq – Horizontal vs Vertikal Gel Elektroforez
Gel elektroforezi genetikada DNT, RNT və digər zülalları ehtiva edən qarışıqları müvafiq yük və molekulyar ölçülərə görə ayırmaq üçün istifadə edilən laboratoriya üsuludur. Bu üsulla ayrılması lazım olan DNT, RNT və ya zülallar kiçik məsamələri olan bir geldən keçir. Molekullar elektrik sahəsi ilə gel vasitəsilə hərəkət edir. Molekullar gelin məsamələrindən keçir və hərəkət sürəti onların müvafiq uzunluqları ilə tərs mütənasibdir. Buna görə də, molekulyar ölçüsü aşağı olan molekullar daha yüksək molekulyar çəkiyə malik olan molekullardan daha sürətli hərəkət edəcəklər. Elektrik sahəsi gelin iki ucundakı yük fərqi ilə yaranır. Bir ucunda müsbət yük, digər ucunda isə mənfi yük var. DNT və RNT molekulları mənfi yüklü olduğundan, gelin müsbət yüklü ucuna doğru çəkiləcəklər. Gel elektroforezi iki müxtəlif üsulla ola bilər: üfüqi gel elektroforezi və şaquli gel elektroforezi. Üfüqi gel elektroforezində gel üfüqi bir oriyentasiyada mövcuddur və gel qutusunun özündə mövcud olan fasiləsiz işləyən tampona batırılır. Şaquli gel elektroforezində bufer sistemi şaquli istiqamətə yönəldilir və üst və altda müvafiq olaraq bir katod və anod olan iki kamera ilə kəsilir. Bu, üfüqi və şaquli gel elektroforezi arasındakı əsas fərqdir.
Üfüqi Gel Elektroforez nədir?
Üfüqi gel elektroforezi DNT, RNT və ya zülal molekullarının müvafiq molekulyar ölçü və yükə görə ayrılması üçün əsas nəzəriyyədən istifadə edir. Bu texnikada gel üfüqi bir oriyentasiyada mövcuddur və davamlı bir tampona batırılır. Agaroz geli gel qutusunu iki bölməyə ayırmaq üçün istifadə olunur. Gel qutusunun bir ucunda anod, digər ucunda isə katod var. Bir cərəyan tətbiq edildikdə, bu texnikada istifadə olunan tampon yük gradientinin yaradılmasına imkan verir. Doldurma tətbiq edildikdə, gel qızmağa meyllidir. Tampon həmçinin temperaturu optimal səviyyədə saxlayan soyuducu kimi fəaliyyət göstərir. İşləyən tamponun təkrar dövriyyəsi pH gradientinin yaranmasının qarşısını alır. Fasiləsiz bufer sistemindən üfüqi gel elektroforezində istifadə edilə bilməz, çünki gel sisteminin iki bölməsi işləyən buferlə birləşir. Akrilamid gel elektroforezi zamanı protein qarışıqlarını ayırmaq üçün istifadə olunur.
Şəkil 01: Horizontal Gel Elektroforez
Üfüqi gel elektroforezində akrilamid istifadə edilə bilməz, çünki gel qutusu oksigenə məruz qalır. Oksigenin olması səbəbindən akrilamidin polimerləşməsi maneə törədilir və bu, gelin formalaşmasına mane olur. Horizontal gel elektroforezi DNT və RNT-nin ayrılması üçün istifadə edilən səysiz bir üsuldur.
Vertical Gel Elektroforez nədir?
Şaquli gel elektroforez texnikası gel elektroforezinin əsas nəzəriyyəsinə uyğun işləyir, lakin üfüqi gel elektroforez üsulundan daha mürəkkəb hesab olunur. Bu texnika fasiləsiz buferdən istifadə edir. Üst kamerada bir katod, alt kamerada isə anod yerləşir. Hər bölmədə mövcud olan elektrodlar tələb olunan elektrik sahəsini təmin edir. İki quraşdırılmış şüşə lövhənin arasına nazik bir gel qatı tökülür. Buna görə də, gelin yuxarı hissəsi yuxarı kameraya, alt hissəsi isə aşağıdakı kameraya batırılır. Cari tətbiq edildikdən sonra, tamponun kiçik bir hissəsi gel vasitəsilə yuxarı kameradan aşağı kameraya keçir. Bu texnikada tətbiq olunan cərəyan dəqiqə vahidləridir.
Şəkil 02: Şaquli Gel Elektroforez
Şaquli gel elektroforezində bufer yalnız geldən keçir. Bu, ayırma mərhələsində gərginliyin qradiyentinə dəqiq nəzarət etməyə imkan verir. Akrilamid geldən istifadə edilə bilər, çünki bölmələr atmosfer oksigeninə məruz qalmır. Akrilamid gelin daha kiçik məsamə ölçüsü sayəsində daha yüksək ayırdetmə ilə dəqiq ayırma əldə edilə bilər.
Üfüqi və Şaquli gel elektroforezi arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Hər iki sistem gel elektroforezinin əsas nəzəriyyəsinə uyğun işləyir.
- Anod və katod hər iki sistemdə tələb olunan elektrik sahəsini təmin etmək üçün istifadə olunur.
Üfüqi və Şaquli Gel Elektroforez Arasındakı Fərq Nədir?
Üfüqi vs Şaquli Gel Elektroforez |
|
| Üfüqi Gel Elektroforezi gelin üfüqi oriyentasiyada olduğu gel elektroforez üsuludur. | Vertical Gel Elektroforezi gelin şaquli istiqamətləndirildiyi bir gel elektroforez üsuludur. |
| Bufer | |
| Üfüqi gel elektroforezi davamlı tampondan ibarətdir. | Çalışan bufer şaquli gel elektroforezində fasiləsizdir. |
| Akrilamid İstifadəsi | |
| Akrilamid üfüqi gel elektroforezi üçün istifadə edilə bilməz, çünki gel qutusu atmosfer oksigeninə məruz qalır. | Gel iki ayrı kameraya görə atmosfer oksigeninə məruz qalmadığından, akrilamid şaquli gel elektroforezi üçün istifadə edilə bilər. |
| Funksiya | |
| Üfüqi gel elektroforezi daha çox DNT və RNT qarışıqlarının ayrılması üçün istifadə olunur, lakin zülalların deyil. | Şaquli gel elektroforezi zülal qarışıqlarını ayırmaq üçün istifadə olunur. |
Xülasə – Horizontal vs Vertikal Gel Elektroforez
Gel elektroforezi DNT, RNT və zülalların molekullarını ehtiva edən qarışıqların ayrılması üçün geniş istifadə olunan laboratoriya üsuludur. Gel elektroforezinin iki üsulu var: üfüqi və şaquli gel elektroforezi. Üfüqi gel elektroforezində işləyən bufer davamlı, şaquli gel elektroforezində isə kəsilməkdədir. Bu, üfüqi və şaquli gel elektroforezi arasındakı fərqdir. Hər iki sistem gel elektroforezinin ümumi prinsipinə uyğun işləyir.
Üfüqi vs Şaquli Gel Elektroforezin PDF versiyasını endirin
Bu məqalənin PDF versiyasını yükləyə və sitat qeydinə əsasən onu oflayn məqsədlər üçün istifadə edə bilərsiniz. Lütfən, PDF versiyasını buradan yükləyin Üfüqi və Şaquli Gel Elektroforezi Arasındakı Fərq.
