Əsas Fərq – Klonlama və Alt Klonlama
Klonlaşdırma və Altklonlaşdırma, maraq doğuran DNT və ya geni daşıyan genetik olaraq eyni hüceyrələr və ya orqanizmlər yaradan molekulyar bioloji prosedurlardır. Klonlaşdırma, maraqlı genin və ya DNT-nin vektora daxil edilməsini, onun ev sahibi bakteriya daxilində təkrarlanmasını və genetik quruluşun dəqiq surətləri olan hüceyrələrin və ya orqanizmlərin istehsalını əhatə edən bir texnikadır. Subklonlaşdırma, vektora artıq daxil edilmiş maraq doğuran genin ikinci dərəcəli vektora daxil edilməsini, onun ev sahibi bakteriya daxilində təkrarlanmasını və hüceyrələrin və ya orqanizmlərin genetik cəhətdən eyni nüsxələrinin istehsalını əhatə edən bir texnikadır. Klonlaşdırma ilə subklonlaşdırma arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, klonlamada maraq geninin vektora bağlandıqdan sonra klonlaşdırma prosesini davam etdirməsi, subklonlaşdırmada isə artıq klonlaşdırılmış maraq geninin ana vektordan ayrılması və yenidən daxil edilməsidir. alıcı vektoru və prosesi davam etdirin.
Klonlama nədir?
Klonlaşdırma genetik olaraq eyni orqanizmləri və ya hüceyrələri istehsal edən prosedurdur. Təbiətdə klonlaşma aseksual çoxalma vasitələrində baş verir. Genetik rekombinasiya və ya dəyişiklik olmadıqda, qız hüceyrələri valideynin eyni genetik quruluşunu alır. Prokaryotik və eukaryotik orqanizmlər ikili parçalanma, qönçələnmə, mitoz və s. yolu ilə klonlar yaradırlar. Molekulyar biologiyada genlərin və ya DNT-nin spesifik fraqmentlərinin klonlaşdırılması həmin xüsusi DNT bölməsinin strukturunu və funksiyasını öyrənmək üçün məşhur üsuldur.
Molekulyar klonlaşdırmanın əsas məqsədi genetik cəhətdən eyni olan hüceyrələrin və ya maraq doğuran DNT fraqmentini (əsasən genlər) daşıyan orqanizmlərin milyonlarla nüsxəsini çıxarmaqdır. Başqasının dəqiq genetik nüsxələri ilə orqanizmlər yaradır. İlk növbədə, struktur və funksional məlumat əldə etmək və DNT ardıcıllığı üçün molekulyar tədqiqatlarda xüsusi genlər klonlanır. Həmçinin, spesifik zülalların və ya məhsulların geniş miqyasda istehsalı üçün klonlaşdırma geniş istifadə olunur.
Klonlama Proseduru
Klonlaşdırma prosedurunun əsas addımları aşağıdakılardır.
- Maraqlanan genin identifikasiyası və təcrid edilməsi. (Maraqlanan genin PCR ilə gücləndirilməsi).
- Maraqlanan Genin məhdudlaşdırılması həzmi (Məhdudiyyət endonükleazı geni kəsir).
- Vektor DNT-nin həzminin məhdudlaşdırılması. (Vektor DNT də eyni məhdudlaşdırıcı endonükleazdan istifadə etməklə kəsilir).
- Genin vektora daxil edilməsi və rekombinant molekulun formalaşması.
- Rekombinant vektorun ev sahibi bakteriyaya çevrilməsi.
- Transformasiya edilmiş bakteriyaların təcrid edilməsi və identifikasiyası (plazmid vektorunda seçilə bilən gen olmalıdır, daha çox transformasiya edilmiş bakteriyaların ekranlaşdırılması üçün antibiotik müqaviməti geni).
- Ev sahibi daxilində rekombinant gen ifadəsi.
Şəkil_01: Klonlama Proseduru
Subklonlaşdırma nədir?
Subklonlaşdırma, genin istənilən funksionallığını əldə etmək üçün genin ifadəsini görmək üçün maraq doğuran genin bir vektordan digər vektora köçürülməsi prosedurudur. Bu üsulda iki vektor iştirak edir; yəni ana vektor və təyinat vektoru. Klonlanmış əlavələr subklonlaşdırmada yenidən ikinci vektora köçürülür. Geni birinci vektordan ikinci vektora köçürməkdə məqsəd birinci vektorun edə bilmədiyi bir şeyi əldə etmək və ya DNT-nin artıq klonlanmış fraqmentində bir geni yenidən ayırmaq və onu tək ifadə etməkdir. Bu prosedurda başlanğıcda məhdudlaşdırıcı fermentlərdən istifadə olunur.
Alt klonlama Proseduru
Subklonlaşdırmanın əsas addımları aşağıdakılardır.
- Restriksiya endonükleazlarının köməyi ilə, donor plazmidində (ana vektorda) maraq doğuran DNT-nin ayrılması.
- Maraqlanan DNT-nin PCR istifadə edərək gücləndirilməsi.
- PZR məhsulunun (maraqlanan DNT) gel elektroforezi ilə təmizlənməsi.
- Ana plazmiddə maraq doğuran DNT-ni ayırmaq üçün istifadə edilən eyni məhdudlaşdırıcı endonükleazlar vasitəsilə alıcı plazmidin açılması.
- Subklonlaşdırılmış plazmid yaratmaq üçün maraq doğuran DNT-nin (genin) alıcı plazmidinə bağlanması.
- Alt klonlanmış vektorun səlahiyyətli ana bakteriyaya çevrilməsi.
- Transfer edilmiş hüceyrələrin yoxlanılması.
- Plazmid DNT-nin təmizlənməsi və istənilən məhsulların əldə edilməsi üçün DNT ardıcıllığı və ya genlərin ifadəsi üçün istifadə.
Subklonlaşdırma bir genin klonlanmış gen qrupundan təcrid edildiyi hallarda və ya maraq doğuran genin dəqiq funksiyasını görmək üçün maraqlı genin faydalı plazmidə köçürülməsi tələb olunduğu hallarda həyata keçirilir.
Şəkil_02: Altklonlaşdırma Proseduru
Klonlaşdırma və Altklonlaşdırma arasındakı fərq nədir?
Klonlama vs Altklonlama |
|
| Klonlaşdırma genetik olaraq eyni orqanizmləri və ya hüceyrələri istehsal edən prosedurdur. | Subklonlaşdırma, genin istənilən funksionallığını əldə etmək üçün genin ifadəsini görmək üçün maraq doğuran genin bir vektordan digər vektora köçürülməsi prosedurudur. |
| Proses | |
| Maraqlanan DNT-ni orqanizmdən ayırın və vektora bir dəfə daxil edin və klonlayın | Artıq klonlanmış DNT birinci vektordan ayrılır və ikinci vektora daxil edilir və klonlanır. |
| Vektorlar vasitəsilə Hərəkəti daxil edin | |
| Əlavələri (maraqlanan DNT) bir vektordan digər vektora köçürmür. | Əlavələri əsas vektordan təyinat vektoruna köçürün. |
Xülasə – Klonlama və Altklonlaşdırma
Klonlaşdırma, daxil edilmiş gen və ya maraq doğuran DNT ilə genetik olaraq eyni hüceyrələr və ya orqanizmlər yaradır. Maraqlanan DNT-nin ayrılması və bir vektora daxil edilməsi və ev sahibi bakteriya daxilində ifadəsi ilə davam edir. Subklonlaşdırma klonlaşdırma ilə oxşar addımları paylaşır. Bununla belə, subklonlaşdırmada artıq klonlaşdırılmış DNT fraqmenti (maraqlanan gen) vektora daxil edilir və ev sahibi bakteriyaya çevrilir. Klonlaşdırma və subklonlaşdırma arasındakı əsas fərq budur.
