Bitki və heyvan DNT ekstraksiyasının əsas fərqi ondan ibarətdir ki, bitki DNT ekstraksiyasında heyvan DNT ekstraksiyasında hüceyrə tərkibini buraxmaq üçün toxumanı quru buz və ya maye azotda üyüdərək hüceyrə divarını qırmaq lazımdır., heyvan hüceyrələrində hüceyrə divarı olmadığı üçün bu addımı yerinə yetirmək lazım deyil.
Genomik DNT bitki və heyvan hüceyrələrinin genetik materialıdır. Genomik DNT hər bir bitki və ya heyvan üçün unikaldır. Keyfiyyətli DNT-nin DNT hasilatı molekulyar tədqiqat üçün ilkin şərtdir. Orqanizmlərin DNT-si identifikasiya, xəstəliklərin diaqnostikası, spesifik genlərin və ardıcıllıqların aşkarlanması, məhkəmə-tibbi ekspertiza məqsədləri, atalıq testi, genom ardıcıllığının müəyyən edilməsi, dərman preparatlarının hazırlanması və s. DNT çıxarma üsulu hüceyrələrin növündən asılı olaraq dəyişir – istər heyvan hüceyrəsi, istərsə də bitki hüceyrəsi.
Bitki DNT Çıxarışı nədir?
Bitki hüceyrələrində DNT müxtəlif molekulyar tədqiqatlar üçün çıxarılır. Bütöv, saf genomik DNT-ni çıxarmaq tələb olunur. Beləliklə, heyvan hüceyrələrindən DNT çıxarma protokollarından fərqli olan müxtəlif növ DNT çıxarma protokolları mövcuddur. Bunun səbəbi bitki hüceyrələrində hüceyrə məzmununu çıxarmaq üçün qırılmalı olan hüceyrə divarının olmasıdır.
Çıxarma adətən bitki toxumalarının quru buzda və ya maye azotda havan və havan istifadə edərək üyüdülməsi yolu ilə həyata keçirilir. Sonra hüceyrə membranları pozulur və hüceyrə tərkibi ekstraksiya tamponuna çıxarılır. Bu, adətən bir yuyucu vasitə ilə edilir; SDS (natrium dodesil sulfat) və ya CTAB (setiltrimetilammonium bromid) tamponu. Sərbəst buraxılan DNT EDTA kimi bir xelatlaşdırıcı agentdən istifadə edərək endogen nukleazlardan qorunur. Üstəlik, zülallar xloroform və ya fenoldan istifadə edərək DNT-dən ayrılır.
Şəkil 01: Bitki DNT-sinin çıxarılması
Bitkilər polisaxaridləri və polifenolları, o cümlədən flavonoidləri və digər ikincili metabolitləri sintez edir. Bu birləşmələr təmiz genomik DNT-nin çıxarılmasına mane olur. Beləliklə, əksər bitki DNT hasilatı protokolları bu birləşmələri aradan qaldırmaq üçün sezium xlorid sıxlığı gradient texnikası kimi başqa bir addımı əhatə edir.
DNT çıxarma protokollarının əksəriyyəti DNT ekstraktı üçün təzə yarpaq nümunələrindən istifadə etməyi tövsiyə edir. Bəzi üsullara maye azot və fenol kimi təhlükəli kimyəvi maddələr daxil deyil. CTAB (Cetyl trimethylammonium bromide) protokolu yüksək keyfiyyətli bitki genomik DNT-sinin çıxarılmasını asanlaşdıran məşhur bitki DNT ekstraksiya protokoludur. Bitki DNT-sinin çıxarılması üçün sadə, təhlükəsiz, etibarlı və qənaətcil bir üsuldur. Digər metodların əksəriyyəti CTAB metodunun dəyişdirilmiş versiyalarıdır.
Heyvanların DNT-sinin çıxarılması nədir?
Heyvan DNT-sinin çıxarılması molekulyar analiz üçün heyvan hüceyrələrindən genomik DNT-nin çıxarılmasıdır. Bitki DNT ekstraksiyasından fərqli olaraq, hüceyrə divarının parçalanması heyvan hüceyrələri üçün lazım deyil, çünki hüceyrə divarı yoxdur. Qan hüceyrələri müxtəlif məqsədlər üçün istifadə edilən heyvan hüceyrələrinin ən çox yayılmış növüdür.
Şəkil 02: DNT Çıxarışı
Fenol-xloroform üsulu qan hüceyrələri üçün ən yaxşı seçimlərdən biridir. Bu üsuldan DNT çıxararkən DNT-nin məhsuldarlığı və keyfiyyəti yüksək olur. Bu, maye-maye DNT ekstraksiya protokoludur və bu üsul DNT molekullarını bir-birinə qarışmayan məhlullarda həll olmaları əsasında ayırır. Fenol, xloroform və izoamil spirti bu metodun əsas üç tərkib hissəsidir.
Bitki və Heyvan DNT-sinin çıxarılması arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Həm bitki, həm də heyvan DNT-sinin çıxarılması zamanı hüceyrə membranları pozulmalıdır.
- DNT endogen nukleazlardan qorunmalıdır.
- Bundan başqa, DNT-nin kəsilməsinin qarşısı alınmalıdır.
- Bitki DNT və heyvan DNT-sinin çıxarılması üçün kommersiya dəstləri mövcuddur.
- Bitki və heyvan DNT-sinin çıxarılması üsullarının əksəriyyəti davamlı modifikasiya və standartlaşdırma tələb edir.
Bitki və Heyvan DNT-sinin Çıxarılması Arasındakı Fərq Nədir?
Bitki və heyvan DNT-sinin çıxarılması arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, bitki DNT-sinin çıxarılması hüceyrə divarını qırmaq üçün quru buzda və ya maye azotda bitki toxumasının üyüdülməsini tələb edir, heyvan DNT-sinin çıxarılması isə bu addımı tələb etmir. hüceyrələrin hüceyrə divarı yoxdur. CTAB üsulu bitki DNT-sinin çıxarılması üçün ən yaxşı üsullardan biridir, fenol-xloroform üsulu isə heyvan DNT-sinin çıxarılması üçün ən yaxşı üsullardan biridir.
Aşağıda infoqrafik cədvəldə bitki və heyvan DNT-sinin çıxarılması arasındakı fərqlər göstərilir.
Xülasə – Bitki və Heyvan DNT Çıxarışı
Müxtəlif hüceyrə növlərindən DNT-nin çıxarılması üçün müxtəlif üsullar mövcuddur. Buna görə də, bitki DNT ekstraksiya protokolları heyvan hüceyrəsi DNT çıxarma protokollarından fərqlənir. Bitki DNT-sinin çıxarılması hüceyrə divarının, hüceyrə membranının və nüvə membranının pozulmasını, heyvan DNT-sinin çıxarılması isə hüceyrə membranının və nüvə membranının parçalanmasını tələb edir. Daha da əhəmiyyətlisi, heyvan hüceyrəsi DNT-sinin çıxarılması quru buzda və ya maye azotda üyüdülməklə hüceyrə divarlarının pozulmasını tələb etmir. Beləliklə, bu, bitki və heyvan DNT-sinin çıxarılması arasındakı əsas fərqdir.
