Əsas Fərq – SDS Səhifəsi ilə Western Blot
Western blotting zülal nümunəsindən spesifik zülal aşkarlayan texnikadır. Bu texnika bir neçə əsas addım vasitəsilə həyata keçirilir: gel elektroforezi, ləkələmə və hibridləşdirmə. Natrium dodesil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi (SDS Page) zülalları ölçülərinə (molekulyar çəkilərinə) görə ayırmaq üçün istifadə edilən bir növ gel elektroforezi üsuludur. Western blot, SDS Səhifəsindəki zülalların eyni naxışını köçürmək üçün istifadə edilən ləkələmə membranının xüsusi təbəqəsidir. SDS Səhifəsi ilə western blot arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, SDS Səhifə qarışıqda zülalların ayrılmasına imkan verir, western blot isə qarışıqdan müəyyən bir zülalın aşkarlanmasına və miqdarının müəyyən edilməsinə imkan verir. Hər ikisi protein analizi tədqiqatlarında faydalıdır.
SDS Səhifəsi nədir?
SDS Page zülalların ayrılması üçün istifadə olunan gel elektroforez üsuludur. Daha çox biokimya, genetika, məhkəmə tibb və molekulyar biologiyada istifadə olunur. Zülallar nümunədən çıxarıldıqdan sonra SDS və poliakrilamiddən ibarət gel üzərində işlədilir. SDS zülalları xəttiləşdirmək (zülalları denatürasiya etmək) və onların molekulyar kütləsinə mütənasib olaraq xəttiləşdirilmiş zülallara mənfi yük vermək üçün istifadə edilən anion yuyucu vasitədir. Poliakrilamid gel üçün möhkəm dayağa çevrilir. Mənfi yüklü denatürləşdirilmiş zülallar gel vasitəsilə aparatın müsbət ucuna doğru miqrasiya edir. Zülalların ölçülərinə görə miqrasiya sürətləri zülallar arasında fərqlənir və ayrılma baş verir. Buna görə də, SDS səhifəsi fərdi zülalların ölçülərinə görə ayrılması üçün faydalıdır.
Zülalların fraksiyalaşdırılması üçün poliakrilamid gelin hazırlanması SDS Səhifəsində mühüm addımdır. Poliakrilamidin düzgün konsentrasiyası və istifadə olunan çarpaz əlaqə agentinin növü gelin fiziki xüsusiyyətlərinə güclü təsir göstərir, bu da müxtəlif zülalların faktiki ayrılmasını təmin edir. Effektiv ayrılması üçün gelin məsamə ölçüləri düzgün idarə olunmalıdır. Bununla belə, SDS Səhifəsi yüksək keyfiyyətli zülal ayırma texnikası hesab olunur.
SDS Page texnikasının zülal analizində əsas məhdudiyyəti var. SDS ayrılmadan əvvəl zülalları denatürasiya etdiyi üçün fermentativ aktivliyi, zülalla əlaqəni, zülal kofaktorlarını və s. aşkar etməyə imkan vermir.
Şəkil 01: SDS Səhifəsi
Western Blot nədir?
Western blotting texnikası zülal qarışığından xüsusi zülalın aşkarlanmasına və zülalın miqdarının və molekulyar çəkisinin ölçülməsinə imkan verir. Western blot, SDS-poliakrilamid geldə zülal naxışlarının güzgü şəklini almaq üçün ləkələmə proseduru zamanı istifadə olunan membrandır. Vestern blotlama üçün istifadə olunan membran əsasən nitroselüloz və ya poliviniliden difloriddən (PVDF) ibarətdir. Köçürülmüş zülal olan membran istənilən proteini müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər. Hibridləşmə yolu ilə istənilən zülalın aşkarlanması üçün yüksək keyfiyyətli antikor tələb olunur. Antikor onun spesifik antigeninə bağlanır və zülal olan arzu olunan antigenin varlığını ortaya qoyur.
Zülalların SDS poliakrilamid gelindən western blota köçürülməsi elektroblotlama ilə həyata keçirilir. Zülalların geldən elektroforezləşməsinə və nitroselüloz membranına (qərb ləkəsi) keçməsinə səbəb olan effektiv və sürətli üsuldur.
Şəkil 02: Western Blot
SDS Page ilə Western Blot arasındakı fərq nədir?
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page gel elektroforez texnikasıdır. | Western blot qarışıqdan spesifik zülal aşkar etmək üçün membran üzərində həyata keçirilən texnikadır. |
| İstifadə edin | |
| SDS səhifəsi zülalları ölçülərinə görə ayırmağa imkan verir. | Western blot modelini dəyişmədən SDS səhifə gelində zülalların köçürülməsinə imkan verir və xüsusi antikorlarla hibridləşdirməyə imkan verir. |
| Dezavantajlar | |
| Protein denatürasiyası, yüksək qiymət və neyrotoksin kimyəvi maddələrinin olması bu texnikanın çatışmazlıqlarıdır. | Bu texnika çox vaxt aparır və yaxşı təcrübəli şəxsi və xüsusi idarə olunan şərtlər tələb edir. |
Xülasə – SDS Page vs Western Blot
SDS səhifəsi və western blot protein analizində iştirak edən iki üsuldur. SDS Səhifəsi gel üzərində zülalların molekulyar çəkisinə görə asanlıqla ayrılmasına imkan verir. Western blot spesifik antikorlarla hibridləşmə yolu ilə spesifik zülalın varlığını və miqdarını təsdiq etməyə kömək edir. Bu, SDS Səhifəsi ilə western blot arasındakı fərqdir.
