Əsas Fərq – Gel Elektroforez və SDS Səhifəsi
Gel elektroforezi elektrik sahəsində makromolekulları ayıran bir texnikadır. Molekulyar biologiyada DNT, RNT və zülalları molekulyar ölçülərinə görə qarışıqlardan ayırmaq ümumi bir üsuldur. SDS Page zülalları zülal qarışığından ölçülərinə görə ayırmaq üçün istifadə edilən gel elektroforez növüdür. Gel elektroforezi DNT, RNT və zülalların ayrılması üçün tətbiq olunan normal texnikaya istinad etmək üçün istifadə edilən bir termindir, SDS Page isə gel elektroforezinin bir növüdür. Bu gel elektroforezi ilə SDS Səhifəsi arasındakı əsas fərqdir.
Gel Elektroforez nədir?
Gel elektroforezi laboratoriyalarda DNT, RNT, zülallar və s. kimi yüklü molekulları onların qarışıqlarından ayırmaq üçün istifadə edilən ümumi üsuldur. Gel elektroforezində bir gel istifadə olunur. Molekulyar ələk kimi fəaliyyət göstərir. Gel elektroforezində istifadə olunan iki növ gel var, yəni agaroza və poliakrilamid. Gel və gel preparatının seçilməsi gel elektroforezlərində nəzərə alınmalı vacib amillərdir, çünki gel elektroforezi vasitəsilə molekulların yaxşı ayrılması üçün gelin məsamə ölçüsü diqqətlə idarə edilməlidir. Gel elektroforezində gelin iki ucuna bağlı elektrik sahəsi var. Gelin bir ucu müsbət, digər ucu isə mənfi yüklüdür.
DNT və RNT mənfi yüklü molekullardır. Onlar gelin mənfi ucundan gelə yükləndikdən və elektrik sahəsinə tətbiq edildikdən sonra gel məsamələri vasitəsilə gelin müsbət yüklü ucuna doğru miqrasiya edirlər. Miqrasiya sürəti molekulun yükündən və ölçüsündən asılıdır. Kiçik molekullar daha böyük molekullara nisbətən gel məsamələri vasitəsilə asanlıqla miqrasiya edirlər. Beləliklə, kiçik molekullar gel vasitəsilə uzun məsafə qət edir və daha böyük molekullar qısa məsafəni qət edir. Molekulların gel üzərində hərəkətini müşahidə etmək üçün xüsusi növ boyalardan istifadə olunur. Elektrik sahəsi müəyyən bir müddət ərzində tətbiq edilir və molekulların itməsinin qarşısını almaq və molekulları hərəkət etdikləri mövqelərdə saxlamaq üçün dayandırılır. Geldə müxtəlif zolaqlar müşahidə oluna bilər. Bu zolaqlar müxtəlif ölçülü molekulları təmsil edir. Beləliklə, gel elektroforezi molekulları ölçülərinə görə fərqləndirmək üçün faydalıdır.
Gel elektroforezi Molekulyar biologiyada PCR, RFLP, klonlaşdırma, DNT ardıcıllığı, cənub ləkələmə, genom xəritələşdirilməsi və s. kimi hazırlıq texnikası kimi müxtəlif texnikalara daxil edilmişdir.
Şəkil 01: Agaroz gel elektroforezi
SDS Səhifəsi nədir?
Natrium dodesil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi (SDS Page) zülalları ayırmaq üçün istifadə edilən gel elektroforez növüdür. Zülalları ayırmaq üçün gel elektroforezi istifadə edildikdə, zülallar DNT və RNT kimi mənfi yüklü olmadığından və müsbət və ya mənfi sonluğa doğru miqrasiya etmədiyi üçün xüsusi müalicə tələb olunur. Beləliklə, zülallar gel elektroforezindən əvvəl denatürasiya olunur və mənfi yüklə örtülür. Natrium dodesil sulfat (SDS) adlanan yuyucu vasitə ilə həyata keçirilir. Dəstəkləyici mühit üçün SDS və poliakrilamid geldən istifadə edən gel elektroforezi SDS Page kimi tanınır. Bu texnika adətən biokimya, genetika, məhkəmə tibb və molekulyar biologiyada istifadə olunur.
SDS Səhifəsi zamanı zülallar SDS ilə qarışdırılır. SDS zülalları xətti formada açır və onları molekulyar kütlələrinə mütənasib olan mənfi yüklə örtür. Mənfi yükə görə zülal molekulları gelin müsbət yüklü ucuna doğru miqrasiya edir və molekulyar kütlələrinə görə ayrılır. SDS Page-də gel üçün möhkəm dayaq kimi poliakrilamid istifadə olunur. Zülalların faktiki ayrılması əsasən gelin xüsusiyyətlərindən asılıdır. Buna görə də, poliakrilamid gel hazırlanması diqqətlə aparılmalı və poliakrilamidin düzgün konsentrasiyalarından istifadə edilməlidir. Poliakrilamid gellər agaroza gellərə nisbətən yüksək rezolyusiyaya malikdir. Beləliklə, SDS Səhifəsi zülalların ayrılması üçün yüksək ayırdetmə üsulu hesab olunur.
SDS Səhifəsi denaturasiya edən gel elektroforezinin bir növüdür. Protein analizində böyük bir məhdudiyyət var. SDS ayrılmadan əvvəl zülalları denatürasiya etdiyi üçün fermentativ aktivliyi, zülalla əlaqəni, zülal kofaktorlarını və s. aşkar etməyə imkan vermir.
Şəkil 02: SDS səhifəsi
Gel Elektroforez və SDS Səhifəsi arasındakı fərq nədir?
Gel Elektroforez vs SDS Səhifə |
|
| Gel elektroforezi elektrik sahəsindən istifadə edərək makromolekulları ayırmaq üçün həyata keçirilən üsuldur. | SDS Page zülalları kütlələrinə görə ayırmaq üçün istifadə edilən yüksək ayırdetmə qabiliyyətinə malik gel elektroforez üsuludur. |
| Gel Run | |
| Üfüqi və ya şaquli şəkildə həyata keçirilə bilər. | SDS Səhifəsi həmişə şaquli işləyir. |
| Ayrılıq üçün əsas | |
| Ayırma şarja və ölçüyə görə baş verir. | Protein ayrılması kütlə və yükə görə baş verir. |
| Qətnamə | |
| Agarose gel elektroforezi aşağı, poliakrilamid gel elektroforezi isə daha yüksək rezolyusiyaya malikdir | SDS Səhifəsi daha yaxşı rezolyusiyaya malikdir. |
| Denaturasiya | |
| Gel elektroforezi həm denaturasiya edən, həm də denaturasiya etməyən üsulları əhatə edir. | SDS Səhifəsi ayrılmadan əvvəl zülalları denatürasiya edir. |
Xülasə – Gel Elektroforez və SDS Səhifəsi
Gel elektroforezi DNT, RNT və zülalların ölçüsünə və yükünə görə ayrılması və təhlili üçün istifadə edilən ümumi üsuldur. Gel elektroforezinin iki əsas növü var, yəni agaroz gel elektroforezi və poliakrilamid gel elektroforezi. Agaroza gelləri əsasən nuklein turşularının ayrılması üçün istifadə olunur; daha yüksək ayırdetmə tələb olunduqda, poliakrilamid gellərdən istifadə olunur. SDS Page zülalların mürəkkəb qarışıqlarını ayırmaq üçün geniş istifadə olunan gel elektroforez növüdür. Yüksək keyfiyyətli zülal ayırma texnikası hesab olunur. Bu gel elektroforezi ilə SDS Səhifəsi arasındakı fərqdir.
