Əsas Fərq – SDS Səhifəsi ilə Doğma Səhifə
SDS və yerli səhifə Molekulyar Biologiyada istifadə olunan iki növ poliakrilamid gel elektroforez texnikasıdır. SDS Page ilə Native Page arasındakı əsas fərq istifadə olunan poliakrilamid gel növüdür. SDS Səhifəsində bir denaturasiya geli istifadə olunur, buna görə də molekullar molekulyar çəkilərinə görə ayrılır. Bunun əksinə olaraq, Native Page-də denaturasiya etməyən gellərdən istifadə olunur. Buna görə də molekullar ölçüsünə, yükünə və formasına görə ayrılır.
Poliakrilamid Gel Elektroforez (Səhifə) akrilamid monomerlərinin metilen bisakrilamidlə polimerləşdirilməsi ilə hazırlanmış geldən istifadə edir. Poliakrilamid agaroza nisbətən daha sərt və istiliyə daha davamlıdır. Poliakrilamid gelləri zülalların səmərəli şəkildə ayrılmasına imkan verən daha kiçik məsamə ölçüsünə malikdir. Səhifə parametrlərinin iki əsas növü var, yəni SDS Səhifəsi və Doğma Səhifə. SDS Page və ya Natrium-Dodesil Sülfat Poliakrilamid gel elektroforezi zülalları molekulyar çəkilərinə görə ayırır. SDS Səhifəsində denaturasiya gellərindən istifadə olunur. Native Page denaturasiya etməyən gellərdən istifadə edir və zülalları onların ölçüsünə, yükünə və formasına görə ayırır (3D uyğunluq).
SDS Səhifəsi nədir?
SDS Səhifəsi zülalları molekulyar çəkilərinə görə ayırmaq üçün istifadə edilən ən çox yayılmış elektroforetik üsuldur. Gel yuyucu vasitə olan SDS (Natrium dodesil sulfat) əlavə edilərək hazırlanır. SDS zülalları monomerlərə çevirir. SDS anion yuyucu vasitədir. Buna görə də, geniş pH diapazonunda zülallara xalis mənfi yük əlavə edir. Zülal molekullarına xalis mənfi yük verildikdə, yüklərin dəyişməsi səbəbindən mürəkkəb strukturlar parçalanır. Mənfi yükə görə zülallar müsbət tərəfə çəkilir. Beləliklə, aşağı molekulyar çəkiyə malik molekullar gel matrisində daha sürətli hərəkət edir və anoda yaxın müşahidə oluna bilər, halbuki daha yüksək molekulyar çəkiyə malik zülallar quyulara daha yaxın müşahidə edilir.
Şəkil 01: SDS Səhifəsi
SDS-nin polipeptid zəncirinə bağlanması onun nisbi molekulyar kütləsi ilə mütənasibdir. Beləliklə, molekulyar kütlə SDS Səhifəsi vasitəsilə də müəyyən edilə bilər. SDS Page gellərinin boyanması bromofenol mavisi ilə rənglənir. SDS səhifəsinin tətbiqləri, nisbi molekulyar kütləni qiymətləndirmək və zülal qarışığında zülalların nisbi bolluğunu müəyyən etmək üçün istifadə oluna bilən daha geniş ölçülərə malikdir. SDS Page zülalların qarışığında zülal paylanmasını müəyyən etmək üçün də istifadə edilə bilər. SDS Səhifəsi zülalları təmizləmək və qiymətləndirmək üçün də tətbiq olunur. O, western blotting və hibridləşdirmə üçün ilkin prosedur kimi istifadə olunur, bu da öz növbəsində zülal xəritələşdirilməsi və identifikasiyası üçün istifadə olunur.
Doğma Səhifə nədir?
Native Poliakrilamid gel elektroforezi (Native Page) denaturasiya etməyən geldən istifadə edir. Buna görə də gel matrisinə SDS və ya hər hansı digər denaturasiyaedici agent əlavə edilmir. Native Page-də zülalların ayrılması zülalın yükünə və ölçüsünə əsaslanır. Buna görə də zülalın hərəkətliliyi zülalın yükündən və ölçüsündən asılıdır.
Zülalın yükü amin turşularının yan zəncirlərindən asılıdır. Yan zəncirlər mənfi yüklüdürsə, zülal ümumi mənfi yük alacaq və əksinə. Zülallar baş verən qatlanma səbəbiylə 3D konformasiyasını saxlayır. Qatlanma disulfid bağları, hidrofobik qarşılıqlı təsirlər və Hidrogen bağları kimi zülallardakı bir neçə bağ növündən qaynaqlanır. Buna görə, əgər yerli Səhifə neytral pH-da aparılırsa, zülallar zülalın molekulyar formasına uyğun olaraq ayrılacaqdır. Buna görə də, Native Səhifə zülalın yükündəki və ya uyğunluqdakı dəyişikliyi aşkar etmək üçün həssas bir texnika kimi istifadə edilə bilər.
Doğma Səhifənin əsas üstünlüyü ondan ibarətdir ki, Səhifə təhlili üçün istifadə olunan zülal Səhifə analizindən sonra orijinal vəziyyətində bərpa oluna bilər, çünki proses zamanı zülal pozulmur. Native Səhifə nisbətən yüksək məhsuldarlıq texnikasıdır və zülalın dayanıqlığı artır.
Şəkil 02: Doğma Səhifə
Gelin işlənməsi başa çatdıqdan sonra Native Page geli bromofenol mavisi və ya hər hansı digər uyğun rəngləmə reagenti ilə boyanmaqla baxmaq olar. Native Page tətbiqlərinə insan rekombinant eritropoietin kimi qlikoproteinlər də daxil olmaqla turşu zülalların ayrılması və ya Sığır Serum Albuminində (BSA) mövcud olan zülalların müəyyən edilməsi daxildir.
SDS Səhifəsi ilə Doğma Səhifə arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Həm SDS Page, həm də Native Page sistemləri gelin matrisi kimi poliakrilamid geldən istifadə edir.
- Hər ikisi zülalların ayrılması və identifikasiyası üçün istifadə olunur.
- Hər ikisi birləşmələri ayırmaq üçün elektroforetik hərəkətlilikdən istifadə edir.
- Hər ikisi şaquli və ya üfüqi şəkildə edilə bilər (əsasən şaquli Səhifə parametrləri kimi edilir, çünki qaçış uzunluğu daha çoxdur).
- Gel çəni, daraqlar, enerji təchizatı daxil olmaqla elektroforez aparatı hər iki texnikanın işləməsi üçün tələb olunur.
- Gelin vizuallaşdırılması hər iki texnikada rəngləmə üsulları ilə həyata keçirilə bilər.
SDS Səhifəsi ilə Doğma Səhifə Arasındakı Fərq Nədir?
SDS Səhifəsi ilə Doğma Səhifə |
|
| SDS Səhifəsi və ya Natrium-dodesil sulfat Səhifəsi zülalları molekulyar çəkilərinə görə ayırır və denaturasiya edən geldən istifadə edir. | Native Page denaturasiya etməyən gellərdən istifadə edir və zülalları onların ölçüsünə, yükünə və formasına (3D uyğunluq) görə ayırır. |
| Gelin növü | |
| SDS səhifəsində denaturasiya geli istifadə olunur. | Doğma səhifədə denaturasiya etməyən gel istifadə olunur. |
| SDS-nin olması | |
| SDS SDS səhifəsində nümunəyə mənfi yük vermək üçün yuyucu vasitə kimi mövcuddur. | SDS ana səhifədə yoxdur. |
| Ayırma Əsası | |
| Zülalların ayrılması SDS səhifəsindəki zülalın molekulyar çəkisindən asılıdır. | Ayırma yerli səhifədəki zülal molekulunun ölçüsü və formasından asılıdır. |
| Zülalın Sabitliyi | |
| Zülalın sabitliyi SDS səhifəsində aşağıdır. | Doğma səhifədə zülalın sabitliyi yüksəkdir. |
| Orijinal Proteinin Bərpası | |
| SDS səhifəsində denatürasiya edildiyi üçün mümkün deyil. | Əsas səhifədə mümkündür. |
Xülasə – SDS Səhifəsi və Yerli Səhifə
SDS Page və Native Page zülalları ayırmaq üçün istifadə edilən iki növ Poliakrilamid gel elektroforez texnikasıdır. SDS Page SDS adlı yuyucu vasitə ilə işlənir. SDS zülala ümumi mənfi yük verir ki, bu da zülalın denatürasiyası ilə nəticələnir. Buna görə də zülallar molekulyar çəkilərinə görə ayrılır. Bunun əksinə olaraq, Native Page texnikası heç bir denaturasiya agentindən istifadə etmir. Beləliklə, zülallar ya ölçüsünə, ya da formasına görə ayrılır. Bu, SDS səhifəsi ilə yerli səhifə arasındakı fərqdir.
