Adi yuvalanmış və real zamanlı PCR analizləri arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, adi PCR DNT-nin xüsusi ardıcıllığını gücləndirmək üçün işlənib hazırlanmış bir texnikadır və yuvalanmış PZR iki ardıcıl gücləndirmə reaksiyasından ibarət ənənəvi PCR-in modifikasiyasıdır. -zamanlı PCR, gücləndirilmiş məhsulun miqdarını təyin edə bilən adi PCR variantıdır.
PCR tədqiqat və tibbdə DNT-ni aşkar etmək üçün geniş istifadə olunan çox yayılmış elmi texnikadır. PCR testləri antigenləri DNT və ya RNT-ni aşkar edərək aşkar etmək üçün istifadə olunur. Ümumiyyətlə, virus RNT antikorları aşkar etmədən və ya xəstəliyin simptomlarını göstərmədən əvvəl bədəndə mövcuddur. PCR testi kiminsə virusa sahib olub-olmadığını erkən müəyyən edə bilər. Hazırda PCR COVID-19 xəstəliyini aşkar etmək üçün standart testdir. Real vaxtda PCR, yuvalanmış PCR, multipleks PCR, qaynar başlanğıc PCR və uzunmüddətli PCR və s. kimi müxtəlif PCR üsulları mövcuddur.
Adi PCR Təhlilləri nədir?
Adi PCR analizi molekulyar bioloji laboratoriyalarda müntəzəm olaraq həyata keçirilən in vitro DNT gücləndirmə texnikasıdır. Bu üsul müəyyən bir DNT fraqmentinin minlərlə və milyonlarla nüsxəsini istehsal etməyə imkan verdi. Kary Mullis bu texnikanı 1980-ci ildə təqdim etdi. Bu texnikanın çoxlu surətlərini çıxarmaq üçün şablon kimi tanınan DNT parçası lazımdır. Taq polimeraza DNT polimeraza fermenti kimi işləyir və şablon ardıcıllığının yeni zəncirlərinin sintezini katalizləyir.
PZR qarışığındakı primerlər fraqment uzantıları üçün başlanğıc nöqtələri kimi işləyəcək. DNT-nin surətlərini çıxarmaq üçün lazım olan bütün maddələr PCR qarışığına daxildir. PCR reaksiyası PCR maşınında aparılır və o, düzgün PCR qarışığı və düzgün PCR proqramı ilə qidalanmalıdır. Əgər reaksiya qarışığı və proqram düzgündürsə, o, çox az miqdarda DNT-dən DNT-nin müəyyən hissəsinin lazımi sayda nüsxəsini çıxaracaq.
Şəkil 01: Ənənəvi PCR Təhlili
PZR reaksiyasında iştirak edən üç əsas mərhələ var: denatürasiya, primerin tavlanması və ipin uzadılması. Bu üç addım üç fərqli temperaturda baş verir. PCR tamponu Taq polimeraz fəaliyyəti üçün optimal şəraiti saxlayır. PCR reaksiyasının bu üç mərhələsi lazımi miqdarda PCR məhsulu istehsal etmək üçün təkrarlanır. Hər bir PCR reaksiyasında DNT nüsxələrinin sayı iki dəfə artır. Beləliklə, PCR-də eksponensial gücləndirmə müşahidə edilə bilər. PCR məhsulu gel elektroforezindən istifadə etməklə həll edilə bilər, çünki o, gel üzərində görünən miqdarda DNT əmələ gətirir və o, ardıcıllıq kimi sonrakı tədqiqatlar üçün təmizlənə bilər.
PCR tibbi və bioloji tədqiqatlarda dəyərli vasitədir. Xüsusilə məhkəmə-tibbi tədqiqatlarda PCR çox böyük əhəmiyyətə malikdir, çünki o, cinayətkarların kiçik nümunələrindən tədqiqatlar üçün DNT-ni gücləndirə və məhkəmə DNT profilləri yarada bilər. PCR genotipləşdirmə, gen klonlama, mutasiyaların aşkarlanması, DNT ardıcıllığı, DNT mikroarrayları və atalıq testi daxil olmaqla molekulyar biologiyanın bir çox sahələrində geniş istifadə olunur.
Nested PCR Testləri nədir?
Nested PCR, DNT-nin qeyri-spesifik gücləndirilməsini azaldan bir PCR növüdür. Yuvalanmış PCR analizində iki ardıcıl PCR və ya iki ardıcıl gücləndirmə reaksiyası var. İlk gücləndirmə reaksiyası zamanı PCR məhsulu istehsal olunur. Birinci reaksiyadan sonra birinci reaksiyanın PCR məhsulunda ikinci gücləndirmə reaksiyası aparılır. Beləliklə, ikinci reaksiya qarışığındakı primerlər ilk PCR məhsulu ilə birləşir və onu gücləndirir.
Şəkil 02: Daxili PCR
Primer cütləri hər reaksiyada fərqlidir. Yuvalanmış PCR-də primerlərin qeyri-spesifik bağlanması azalır. Daxili PCR analizləri həssaslığı və/və ya spesifikliyi artırmaq üçün faydalıdır. Bununla belə, yuvalanmış PCR maraqlı ardıcıllıqla bağlı bilik tələb edir.
Real-time PCR Analizləri nədir?
Real-time PCR və ya kəmiyyət PCR (Q PCR) PCR məhsullarını kəmiyyətcə ölçən PCR-nin dəyişdirilmiş versiyasıdır. Buna görə də, bu texnika real vaxt PCR maşınından istifadə edərək real vaxtda gücləndirmənin miqdarını müəyyənləşdirir. O, həmçinin nümunədə mövcud olan hədəf ardıcıllığının və ya genin miqdarını təyin etmək üçün uyğun bir üsuldur.
Real-vaxt PCR-nin maraqlı xüsusiyyəti ondan ibarətdir ki, o, həm gücləndirmə, həm də həqiqi kəmiyyətləşdirməni bir addımda birləşdirir. Buna görə də, aşkarlanması üçün gel elektroforez ehtiyacı real vaxt PCR texnikası ilə aradan qaldırıla bilər. PCR reaksiyaları zamanı PCR məhsullarını etiketləmək üçün flüoresan boyaların istifadəsi sonda birbaşa kəmiyyətin müəyyənləşdirilməsinə səbəb olacaqdır. PCR məhsulları yığıldıqda, flüoresan siqnallar da yığılır və onlar real vaxt maşını ilə ölçüləcək. SYBR Green və Taqman real vaxt PCR-nin gücləndirmə prosesini aşkar etmək və ya izləmək üçün iki üsuldur. Hər iki üsul gücləndirmə prosesinin gedişatını izləyir və real vaxtda məhsulun miqdarını bildirir.
Şəkil 03: Real Zamanlı PCR
Real-time PCR gen ifadəsinin kəmiyyətinin müəyyən edilməsi, mikroRNT və kodlaşdırmayan RNT analizi, SNP genotiplənməsi, surətlərin sayı variantlarının aşkarlanması, nadir mutasiyaların aşkarlanması, genetik cəhətdən dəyişdirilmiş orqanizmlərin aşkarlanması və yoluxucu agentlərin aşkarlanması.
Adi iç-içə qurulmuş və real zamanlı PCR analizləri arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Yuvalanmış və real zamanlı PCR analizləri adi PCR analizinin modifikasiyalarıdır.
- Hər üç texnika DNT nümunələrini gücləndirir.
- Onların məhsulları ardıcıllıq və ya analizdə istifadə edilə bilər.
- Bu analizlər primerlər tələb edir.
Adi iç-içə qurulmuş və real vaxtda PCR analizləri arasındakı fərq nədir?
Adi PCR, DNT-nin spesifik ardıcıllığını gücləndirmək üçün hazırlanmış bir texnikadır. Eyni zamanda, Nested PCR iki ardıcıl gücləndirmə reaksiyasından ibarət olan adi PCR-in modifikasiyasıdır və real vaxtda PCR gücləndirilmiş məhsulun miqdarını təyin edə bilən adi PCR variantıdır. Beləliklə, bu, adi yuvalanmış və real vaxt PCR analizləri arasındakı əsas fərqdir. Ənənəvi və real vaxt PCR-dən fərqli olaraq, iç içə PCR iki primer dəstindən istifadə edir. Bundan əlavə, qeyri-spesifik gücləndirməni az altmaq üçün yuvalanmış PCR-də iki ardıcıl gücləndirmə reaksiyası var. bundan əlavə, ənənəvi və real vaxt PCR analizlərində iki ardıcıl gücləndirmə reaksiyası yoxdur.
Aşağıdakı infoqrafika yan-yana müqayisə üçün cədvəl şəklində adi yuvalanmış və real vaxt PCR analizləri arasındakı fərqləri sadalayır.
Xülasə – Ənənəvi və İçəridə Yerləşdirilmiş və Real Zamanlı PCR Təhlilləri
Adi PCR, DNT-nin spesifik fraqmentlərini gücləndirmək üçün hazırlanmış ilk texnikadır. İç-içə PCR və real vaxt PCR adi PCR-in iki variantıdır. İki ardıcıl gücləndirmə reaksiyası və yuvalanmış PCR-də iki primer dəstinin istifadəsi var. Gücləndirilmiş PCR məhsulunun kəmiyyətini müəyyən etmək üçün real vaxtda PCR hazırlanmışdır. Beləliklə, bu, adi yuvalanmış və real vaxt PCR analizləri arasındakı fərqi ümumiləşdirir.
