PCR vs Real-time PCR
PCR və ya Polimeraza zəncirvari reaksiya müasir molekulyar biologiyada inqilabi kəşfdir və ilk dəfə 1983-cü ildə kimyaçı Kary Mullis tərəfindən hazırlanmışdır. O, mürəkkəb DNT-dəki tək ardıcıllığın analiz üçün gücləndirilməsinə imkan verir. PCR-in əsas ideyası ondan ibarətdir ki, DNT ardıcıllığının əks zəncirlərini tamamlayan iki primer bir-birinə doğru yönəldilmişdir; primerlər hər birində digər primeri ehtiva edən tamamlayıcı iplər istehsal edir. Beləliklə, nəticə iki primer arasında yerləşən DNT-yə uyğun gələn böyük miqdarda ardıcıllıqdır. DNT polimeraza fermenti PCR-də primerləri uzatmaq üçün istifadə olunur. DNT polimeraza termostabil fermentdir və şablon DNT-nin denatürasiyası üçün istifadə edilən yüksək temperaturda (94-95 °C) yaşamaq qabiliyyətinə malikdir.
PZR üç mərhələni, yəni təkrarlanan denaturasiya raundlarını, primerlərin yumşaldılmasını və DNT sintezini əhatə edir. Bu reaksiyanı yerinə yetirmək üçün termosikl maşınından istifadə olunur ki, o, temperaturları tez və dəqiq şəkildə dəyişmək üçün proqramlaşdırıla bilsin. PCR-nin tətbiqi cinayət araşdırmaları, DNT barmaq izi, patogenlərin aşkarlanması və erkən insan növlərinin DNT analizidir.
Adi PCR nədir?
Adi PCR-nin üç əsas mərhələsi var, yəni; DNT gücləndirmə mərhələsi, PCR-nin ayrılması və məhsulların aşkarlanması. DNT seqmentlərinin ayrılması adətən agaroz gel elektroforezi ilə həyata keçirilir. Məhsullar daha sonra eteyduim bromid ilə boyanır. Nəhayət, aşkarlama UV işığı altında lentlərin gellər üzərində vizuallaşdırılması ilə əldə edilir. Buna görə də, şərti PCR-in yekun nəticələri rəqəmlərlə ifadə edilmir. Normalda adi PCR yalnız bir parametri aşkar edə bilir.
Real-time PCR nədir?
Real-vaxt PCR məhsulları sintez edildiyi üçün məhsulların gücləndirilməsini aşkar edə bilər. Texnologiyanın inkişafı ilə PCR xüsusilə qidalarda bakteriyaların aşkarlanması və identifikasiyası üçün çox məşhur bir texnika halına gəldi. Real vaxt rejimində PCR floresan boyama sistemindən və flüoresan aşkarlama qabiliyyəti ilə təchiz edilmiş termosikldən istifadə edir.
Adi PCR ilə Real-vaxt PCR arasındakı fərq nədir?
• Adi PCR daha çox vaxt aparır, çünki gücləndirilmiş PCR məhsullarını təhlil etmək üçün gel elektroforezindən istifadə edir. Əksinə, real vaxtda PCR daha az vaxt aparır, çünki o, reaksiyanın erkən mərhələlərində gücləndirmələri aşkar edə bilir.
• Real vaxtda PCR PCR-in eksponensial artım mərhələsində məlumat toplayır, ənənəvi PCR isə reaksiyanın Son nöqtəsində məlumat toplayır.
• Ənənəvi PCR-nin son nöqtəsi nəticələri çox dəqiq olmaya bilər, lakin real vaxtda PCR-nin nəticələri çox dəqiqdir.
• Real-time PCR adi PCR-dən daha həssasdır.
• Ənənəvi PCR çox zəif rezolyusiyaya malikdir, halbuki real vaxtda PCR yüksək ayırdetmə qabiliyyətinə görə çox az dəyişiklikləri aşkarlaya bilir.
• Adi PCR-in son nöqtəsinin aşkarlanması qısa dinamik diapazona malikdir, real vaxtda PCR aşkarlanması isə geniş dinamik diapazona malikdir.
• Adi PCR-dən fərqli olaraq, avtomatlaşdırılmış aşkarlama üsulları real vaxtda PCR-də tapılır.
• Ənənəvi PCR real vaxt PCR-dən daha çox mürəkkəb və çox əmək tələb edir.
• Real-vaxt PCR-dən fərqli olaraq, adi PCR ölü və canlı bakteriyalar arasında fərq qoya bilməz.
• Real vaxtda PCR məhsulları aşkar etmək üçün flüoresan boya sistemindən istifadə edir, adi PCR isə agaroz gel mühitindəki zolaqları vizuallaşdırmaq üçün etidium bromid və UV işığından istifadə edir.
