Xromatofokuslama ilə izoelektrik fokuslama arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, xromatofokuslama ion mübadiləsi qatranlarından istifadə edən bir sütun xromatoqrafiya üsuludur, izoelektrik fokuslanma isə hərəkətsiz pH qradiyenti gellərindən istifadə edən bir növ elektroforez üsuludur.
Xromatofokuslama və izoelektrik fokuslama zülalları izoelektrik nöqtələrinə görə ayıran iki üsuldur. Həm xromatofokus, həm də izoelektrik fokuslanma böyük həll gücünə malikdir. Xromatofokus yüksək qətnamə sütun xromatoqrafiya üsuludur, izoelektrik fokuslama isə elektroforetik ayırma üsuludur. Üstəlik, xromatofokuslama elektrik sahəsindən istifadə etmir, izoelektrik fokuslanma isə elektrik sahəsinə ehtiyac duyur.
Xromatofokuslama nədir?
Xromatofokuslama zülalları izoelektrik nöqtələrindəki fərqlərə görə ayıran yüksək elüsyonlu xromatoqrafiya növüdür. Bir ion dəyişdirici qatran sütunu və daxili inkişaf etmiş bir pH gradientindən istifadə edir. İzoelektrik fokuslamadan fərqli olaraq, xromatofokuslama elektrik sahəsini əhatə etmir. Xromatofokus, hətta yalnız 0,02 pH vahidi ilə fərqlənən çox oxşar molekulları həll edə bilən güclü təmizləmə texnikasıdır. Buna görə də, çox oxşar komponentləri ayırmaq üçün yüksək ayırdetmə tələb olunduqda xromatofokus son cilalama addımı kimi ən uyğundur.
Xromatofokuslamada nümunə başlanğıc buferi ilə qarışdırılaraq sütuna tətbiq edilir. İzoelektrik nöqtəsindən yuxarı pH olan zülallar mənfi yüklənir və onlar sütunun yuxarı hissəsində qalırlar, pH-da izoelektrik nöqtəsindən aşağı olan digər zülallar isə sütundan aşağı miqrasiya edirlər. Ən yüksək izoelektrik nöqtəsi olan zülal əvvəlcə, ən aşağı izoelektrik nöqtəsi olan zülal isə sütundan axırıncı elüt edilir. Bu texnikaya zülal yağıntısı və pH qradientinin xətti kimi bir neçə faktor təsir edir.
İzoelektrik Fokuslama nədir?
İzoelektrik fokuslama müxtəlif molekulları izoelektrik nöqtəsinə əsasən ayıran bir texnikadır. O, həmçinin elektrofokuslama kimi də tanınır. Bu üsul tez-tez bir jeldə protein ayrılması üçün istifadə olunur. İzoelektrik fokuslamada nümunə immobilizasiya olunmuş pH qradiyenti (IPG) gellərinə əlavə edilir. IPG gel pH gradienti ilə kopolimerləşdirilmiş akrilamid gel matrisidir. Zülallar izoelektrik nöqtələrinin pH bölgəsini tapana qədər katoda doğru miqrasiya edirlər. Bir zülal xalis yükü olmayan pH-a çatdıqda, miqrasiya dayandırılır və sabit bir zolaq verir. Eynilə, hər bir zülal öz izoelektrik nöqtəsinə uyğun gələn pH qradiyenti nöqtəsində bir zolaq verir.
Şəkil 01: İzoelektrik Fokuslanma
İzoelektrik fokuslama iki ölçülü gel elektroforezinin ilk addımıdır. Bu texnikada zülallar əvvəlcə izoelektrik nöqtələrinə görə izoelektrik fokuslanma ilə ayrılır və sonra SDS-PAGE vasitəsilə molekulyar çəkilərinə görə ayrılır.
Xromatofokuslama və İzoelektrik Fokuslama arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Xromatofokuslama və izoelektrik fokuslama iki yüksək həlledici üsuldur.
- Hər ikisi zülalların izoelektrik nöqtəsinə əsaslanır.
- Bu üsullar pH gradientindən istifadə edir.
- Hər iki prosedur insan hemoglobin variantlarının xarakteristikası üçün informativdir.
- Onlar pI dəyərlərinin 0,02 pH vahidi qədər fərqli olduğu molekulları həll edə bilər.
Xromatofokuslama ilə İzoelektrik Fokuslama Arasındakı Fərq Nədir?
Xromatofokuslama zülalları izoelektrik nöqtəsinə görə ayıran yüksək ayırdetmə qabiliyyətinə malik sütun xromatoqrafiya texnikasıdır. Bunun əksinə olaraq, izoelektrik fokuslanma kapilyarda əmələ gələn pH qradiyenti boyunca elektrik sahəsinin tətbiqi ilə zülalları izoelektrik nöqtəsinə görə ayıran elektroforetik bir texnikadır. Beləliklə, bu, xromatofokuslama və izoelektrik fokuslama arasındakı əsas fərqdir.
Xromatofokuslama ilə izoelektrik fokuslama arasındakı digər fərq odur ki, xromatofokus elektrik sahəsini əhatə etmir, izoelektrik fokuslama isə elektrik sahəsinə ehtiyac duyur.
Xülasə – Xromatofokuslama və İzoelektrik Fokuslama
Xromatofokuslama və izoelektrik fokuslama molekulların, xüsusən də çox oxşar molekulların yüksək həll etmə qabiliyyətinə malik iki oxşar texnikadır. Xromatofokus yüksək qətnamə sütun xromatoqrafiya üsuludur, izoelektrik fokuslama isə elektroforez üsuludur. Xromatofokuslama, izoelektrik fokuslamadan fərqli olaraq elektrik sahəsini əhatə etmir. Beləliklə, bu, xromatofokuslama və izoelektrik fokuslama arasındakı fərqi ümumiləşdirir.
