GFP ilə EGFP arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, GFP məməli olmayan hüceyrələrin molekulyar klonlanmasına daxil edilmiş vəhşi tipli zülaldır, EGFP isə məməli hüceyrələrində istifadə oluna bilən təkmilləşdirilmiş və ya işlənmiş GFP növüdür..
Molekulyar klonlaşdırma elm adamlarının rekombinant texnologiya vasitəsilə zülalları ifadə etməkdə çox istifadə etdikləri qabaqcıl texnikadır. Rekombinant DNT texnologiyasında rekombinant vektoru ev sahibi orqanizmə uğurla çevirmək lazımdır. Beləliklə, transformasiya prosesi zamanı, maraq doğuran genin ev sahibinə çevrilib-çevrilməməsi müəyyən edilməli və təsdiqlənməlidir. Bunu qiymətləndirmək üçün molekulyar bioloqlar bir neçə üsuldan istifadə edirlər. Bu üsullardan biri reportyor genidir. Bu reportyor genləri düzgün transformantları seçmək üçün seçilə bilən markerlər kimi çıxış edir. Beləliklə, Yaşıl Floresan Zülal (GFP) və Təkmilləşdirilmiş Yaşıl Floresan Zülal (EGFP) molekulyar klonlamada istifadə edilən iki reportyor zülaldır.
GFP nədir?
GFP onu digər flüoresan zülallardan fərqləndirən 238 amin turşusu qalığı və bir neçə seçilə bilən amin turşusu ardıcıllığı bölgəsini ehtiva edən vəhşi tipli zülaldır. Bundan əlavə, bu vəhşi tipli zülal əvvəlcə Aequorea Victoria-dan təcrid olunmuş vəziyyətdə idi; meduza növü. Bununla belə, təbii hadisələrdə meduza müəyyən stimullara cavab olaraq yaşıl rəngli floresans yarada bildi.
Əvvəllər bu konsepsiya elm adamlarını təəccübləndirdi və onlar bunu öz rekombinant DNT texnologiyalarında istifadə etmək qərarına gəldilər. Nəticə etibarı ilə elm adamları vəhşi tipli genin bu mutant formasından gen ifadəsi tədqiqatlarında reportyor gen kimi istifadə etdilər. GFP-nin vəhşi tipli geni otaq temperaturunda və ya ultrabənövşəyi şüa altında flüoresan verən zülal istehsal etməyə qadirdir. Buna görə də, transformatorlara daxil edildikdə, flüoresanlığı ifadə edir və istehsal edir. Transformasiya prosesindən sonra flüoresan nəticə çıxarsa, bu transformasiya prosesinin uğurunu təsdiqləyir. Sadə sözlə desək, flüoresan emissiya maraq geni daşıyan vektorun ev sahibinə uğurlu çevrilməsinə işarə edir.
Şəkil 01: GFP
Bu səbəbdən GFP gen ifadəsinin in vivo markeri kimi çıxış edir. Hazırda GFP istehsal etmək üçün gen mühəndisliyi üsullarından istifadə olunur. Həmçinin, EGFP kimi GFP-nin bir çox təkmilləşdirilmiş versiyaları mövcuddur. Beləliklə, bu, molekulyar klonlaşdırma və gen ifadəsi tədqiqatlarında GFP-dən səmərəli istifadə etməyə imkan verir.
EGFP nədir?
Təkmilləşdirilmiş Yaşıl Floresan Protein və ya EGFP GFP-nin təkmilləşdirilmiş versiyasıdır. Sadə sözlə, biz EGFP-ni vəhşi tipli GFP-nin mühəndis versiyası kimi müəyyən edə bilərik. GFP-nin vəhşi tipli geni mutasiyaya uğradıqda, faydalı təsirlər yaradır. Beləliklə, GFP-nin mutasiya edilmiş geni yeni simvolların ifadəsinə imkan verir və bunun nəticəsində biz təkmilləşdirilmiş xüsusiyyətlərə malik Təkmilləşdirilmiş GFP istehsal edə bilərik. Bundan əlavə, şüalanma və ya kimyəvi üsullardan istifadə edərək vəhşi tipli GFP geninə mutasiyaları uğurla təqdim edə bilərik. Bu mutasiyaya uğramış genlər daha faydalı xüsusiyyətlərə malik olan EGFP istehsal edir.
Şəkil 02: EGFP
EGFP-nin təkmilləşdirilmiş xüsusiyyətləri aşağıdakılardır;
- Daha güclü flüoresan siqnalları buraxa bilir.
- Yüksək həssaslığa malikdir.
- Prokaryotlar və digər aşağı səviyyəli eukariotlar əvəzinə məməli hüceyrələrində istifadə edə bilər.
- Həmçinin, məhsulun artan təmizliyini təmin edir.
Buna görə də, GFP ilə müqayisədə, EGFP gen ifadəsi tədqiqatları üçün üstünlük verilən seçimdir. Bununla belə, məhsul GFP ilə müqayisədə daha bahadır.
GFP və EGFP arasında hansı oxşarlıqlar var?
- GFP və EGFP yaşıl rəng yaymaq qabiliyyətinə malik iki zülaldır
- Buna görə də hər ikisi gen ifadəsi tədqiqatlarında reportyor zülal kimi fəaliyyət göstərir.
- Həmçinin, rekombinant DNT texnologiyasından istifadə etməklə hər ikisini sintez etmək mümkündür.
- Bundan başqa, təkmilləşdirilmiş formaları sintez etmək üçün bu iki növü daha da mutasiya etmək asandır.
GFP ilə EGFP arasındakı fərq nədir?
Müxbir geni rekombinant DNT texnologiyasına maraq göstərən genlə birləşən gendir. Bu, rekombinant vektorun ev sahibinə uğurlu çevrilməsini göstərir. Burada GFP və EGFP müxbir zülal kimi işləyən iki növ yaşıl floresan zülallardır. Bununla belə, GFP və EGFP arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, GFP vəhşi tipdir, EGFP isə GFP-nin mühəndis versiyasıdır. Bundan əlavə, EGFP GFP-dən daha faydalı xüsusiyyətlərə malikdir. Məsələn, EGFP daha güclü flüoresan işıq istehsal edir və GFP-dən daha həssasdır. GFP və EGFP arasındakı digər fərq onlardan istifadə edə biləcəyimiz sistemlərdir. Qeyri-məməli sistemlər GFP, məməli sistemlər isə EGFP istifadə edir.
Aşağıdakı infoqrafika GFP və EGFP arasındakı fərqi cədvəl şəklində təqdim edir.
Xülasə – GFP vs EGFP
GFP və EGFP molekulyar klonlaşdırma və gen ifadəsi tədqiqatlarında reportyor zülallardır. GFP yaşıl floresan zülal olan vəhşi tipli zülaldır. Zülal əvvəlcə Aequorea victoria meduzasından təcrid olunmuş vəziyyətdə idi. Bunun əksinə olaraq, EFGP GFP zülalının təkmilləşdirilmiş formasıdır. Təkmilləşdirilmiş xüsusiyyətləri olan vəhşi tipli mutantdır. Beləliklə, EFGP daha yüksək siqnal gücünə və daha yüksək həssaslığa malikdir. Buna görə də biz onu məməli vektorlarında istifadə edə bilərik. Bunun əksinə olaraq, GFP-nin istifadəsi əsasən yalnız məməli olmayan vektorlarda olur. Ümumiyyətlə, bu GFP və EGFP arasındakı fərqdir.
