Əsas Fərq – DNT vs RNT Çıxarışı
DNT və RNT-nin öyrənilməsi molekulyar biologiya, biotexnologiya və genetikanın əsas anlayışlarını başa düşmək üçün həyati vacib aspektlərdir. Bu tədqiqatlar zamanı eksperimental prosedurları həyata keçirmək üçün təmiz DNT və RNT nümunələrinin çıxarılması lazımdır. DNT və RNT hasilatı arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, DNT hasilatı prosesi DNT-ni təmizləyir, RNT hasilatı isə RNT-ni təmizləyir. DNT-nin çıxarılması prosesi üç fərqli mərhələdən ibarətdir: hüceyrə lizisi və membran lipidlərinin və zülallarının katabolizmi, qatılaşdırılmış duz məhlulu ilə katabolitlərin yığılması və DNT-nin etanol ilə çökməsi. Üç addımlı prosedur iki əlavə addımdan ibarət ola bilər. RNT-nin təmizlənməsi prosesi dörd müxtəlif mərhələdən ibarətdir: hüceyrə lizisi üçün guanidium tiosiyanat əlavə edilməsi, ribonukleazlar daxil olmaqla protein denatürasiyası, xloroform və fenolun əlavə edilməsi ilə RNT-nin ayrılması və etanoldan istifadə edərək çöküntünün yuyulması.
DNT Extraction nədir?
DNT çıxarılması nümunədən DNT-ni təmizləmək üçün istifadə edilən fiziki və kimyəvi prosesdir. DNT hasilatı molekulyar biologiya və məhkəmə elmləri kontekstində mühüm aspektdir. Proses üç əsas mərhələdən ibarətdir. Əvvəlcə maraq hüceyrələri əldə edilməlidir. Sonra, hüceyrəni açan və DNT ilə birlikdə sitoplazmanı ifşa edən hüceyrə membranını qırmaq üçün hüceyrə lizisi asanlaşdırılır. Hüceyrə membranından lipidləri parçalamaq üçün səthi aktiv maddələr və ya digər yuyucu vasitələrdən istifadə edilə bilər, zülallar isə proteazlar tərəfindən katabolize edilir. Bu isteğe bağlı bir addımdır. Hüceyrənin parçalanmasından sonra, katabolize edilmiş molekulların yığılması konsentratlaşdırılmış duz məhlulları ilə asanlaşdırılır. Bunun ardınca zibil yığınlarını DNT-dən ayıran məhlulun sentrifuqalanması aparılır. Bu mərhələdə diferensiallaşdırılmış DNT hüceyrə dövrü ərzində istifadə olunan reagentlər və duzlarla qarışdırılır.
Şəkil 01: DNT çıxarılması
Onu daha da təmizləmək üçün aşağıdakı addımlardan istifadə etmək olar. Metodlardan biri buz kimi soyuq etanolun ayrılmış DNT nümunəsi ilə qarışdırılmasını nəzərdə tutan etanol çöküntüsüdür. DNT spirtdə həll olunmur və bununla da DNT molekullarının bir araya toplanması səbəbindən qranul əmələ gətirir. Natrium asetat bu prosesə ion gücünü artırmaqla yağıntının dərəcəsini artırmaq üçün əlavə edilir. Bunun üçün etanolun çökdürülməsi prosesi ilə yanaşı, fenol-xloroformun çıxarılması prosesi də induksiya edilə bilər. Bu üsulda fenol nümunədə mövcud olan zülalları denatürasiya edir. Santrifüj edildikdən sonra denatürləşdirilmiş zülallar üzvi fazada qalacaq, xloroformla qarışan DNT molekulları isə sulu fazada olacaq. Xloroform fenol qalıqlarını çıxaracaq. Ekstraksiya başa çatdıqdan sonra DNT TE buferində və ya ultra saf suda həll edilmiş vəziyyətdə saxlanılır.
RNT Extraction nədir?
RNT-nin təmizlənməsi bioloji nümunədən RNT-nin təmizlənməsi prosesidir. Hüceyrələrdə və toxumalarda ribonukleazın olması səbəbindən bu proses mürəkkəbdir. Ribonukleaza fermenti RNT-ni sürətlə parçalamaq qabiliyyətinə malikdir. Ribonükleazların kimyəvi təbiəti son dərəcə sabitdir və onları təsirsiz hala gətirmək çətindir. Ribonükleazların neytrallaşdırılması bir seçimdir. Hüceyrələrdə və toxumalarda bu ferment hər yerdə olduğu üçün RNT-nin çıxarılması üçün xüsusi üsullar hazırlanır. Bir çox üsullardan ümumi üsul Quanidinium tiosinat-fenol-xloroformun çıxarılmasıdır.
Şəkil 02: RNT Çıxarışı
Quanidinium tiosinat-fenol-xloroformun çıxarılması üsulu sentrifuqadan və fazaların ayrılmasından asılıdır. Santrifüj ediləcək qarışıq sulu nümunədən və fenol və xloroformdan ibarət su ilə doymuş məhluldan ibarətdir. Santrifüjdən sonra məhlul neytral pH şəraitində (pH 7-8) yuxarı sulu faza və aşağı üzvi fazadan ibarətdir. RNT sulu fazada mövcuddur. Üzvi faza adətən fenolda həll olunan zülallardan və xloroformda həll olunan lipidlərdən ibarətdir. Xaotrop agent (su molekulları arasında hidrogen bağlarını pozmaq qabiliyyətinə malik olan bir molekul) əlavə edilir; bu, guanidinium tiosiyanat kimi tanınır. Bu agent RNT-ni parçalaya bilən və hüceyrə lizizində iştirak edən ribonukleazları ehtiva edən zülalları denatürasiya etmək qabiliyyətinə malikdir. O, həmçinin rRNT-ni ribosom zülallarından ayırır. RNT təmizlənməsinin son mərhələsi sulu fazanın çöküntüsünün etanol ilə yuyulmasıdır. RNT maye azotla da təmizlənə bilər.
DNT və RNT çıxarılması arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Hər iki ekstraksiya prosesi fenol və xloroform kimi zərərli kimyəvi maddələrdən istifadə edir.
- Sentrifuqalama hər iki proses üçün vacib bir texnikadır.
- Etanol çöküntüyü yumaq və təmizlənmiş DNT və ya RNT əldə etmək üçün istifadə olunur.
DNT və RNT çıxarılması arasındakı fərq nədir?
DNT vs RNT çıxarılması |
|
| DNT ekstraksiyası orqanizmdən və ya nümunədən DNT çıxaran prosesdir. | RNT çıxarılması nümunədən RNT çıxaran prosesdir. |
| Addımlar | |
| DNT çıxarılması prosesi iki isteğe bağlı addımdan ibarət üç fərqli addımdan ibarətdir. | RNT çıxarılması prosesi dörd müxtəlif addımdan ibarətdir. |
| Reagentlər | |
| DNT çıxarılması üçün səthi aktiv maddələr, proteazlar (isteğe bağlı), spirt, xloroform, fenol, natrium asetat istifadə olunur. | Quanidium tiosiyanat, xloroform, fenol, etanol RNT çıxarılması üçün istifadə olunur. |
Xülasə – DNT vs RNT Çıxarışı
DNT və RNT hasilatı molekulyar biologiya, genetika və biotexnologiyanın öyrənilməsi üçün eksperimental prosedurların mühüm aspektləridir. Hər iki proses oxşar reagentləri əhatə edir, lakin RNT ekstraksiyasında ribonukleazaların fəaliyyətini azaldan Quanidium tiosiyanat kimi tanınan xüsusi reagentdən istifadə edilir. Bu, DNT və RNT çıxarılması arasındakı əsas fərqdir.
DNT vs RNT Ekstraksiyasının PDF versiyasını endirin
Bu məqalənin PDF versiyasını yükləyə və sitat qeydinə əsasən onu oflayn məqsədlər üçün istifadə edə bilərsiniz. Zəhmət olmasa PDF versiyasını buradan yükləyin DNT və RNT Çıxarışı Arasındakı Fərq
