Əsas Fərq – İmmunofluoressensiya ilə İmmunohistokimya
Molekulyar bioloji üsullardan istifadə edən xəstəliklərin diaqnostikası klinik laboratoriya texnologiyasının yeni inkişaf edən sahəsinə çevrilmişdir. Orqanizmdə DNT, RNT və ya ifadə olunan zülalları təhlil edərək xəstəliyi müəyyən etmək və xəstəliyin səbəbini anlamaq üçün bütün testlər və üsullar daxildir. Molekulyar diaqnostikada sürətli irəliləyişlər yoluxucu və qeyri-infeksion xəstəliklər üzrə əsas tədqiqatların aparılmasına imkan yaratmışdır. Bunlar xəstəlikdə iştirak edən mühüm genlərdə və ya zülallarda ardıcıllıq və ya ifadə səviyyələrindəki dəyişiklikləri müəyyən etmək üçün istifadə olunur. İmmunofluoressensiya (IF) və İmmunohistokimya (IHC) xərçəng biologiyasında geniş istifadə olunan iki üsuldur. IF, monoklonal və poliklonal antikorları təhlil etmək üçün flüoresan aşkarlama metodunun istifadə edildiyi bir IHC növüdür, IHC isə monoklonal və poliklonal antikorları aşkar etmək üçün kimyəvi əsaslı üsullardan istifadə edir. Bu, IF və IHC arasındakı əsas fərqdir.
İmmunofluoressensiya (IF) nədir?
İmmunofluoressensiya analizdə istifadə edilən antikorların aşkarlama məqsədi üçün flüoresan boyalar və ya flüoresan zülallardan istifadə etməklə etiketləndiyi aşkarlama texnikasıdır. Etiketli ikincil antikorlar arzuolunmaz fon siqnalları ilə nəticələnə bilər; buna görə də IF texnikası aşkarlama zamanı arzuolunmaz siqnalların qarşısını almaq üçün hazırda əsas antikorun özünün etiketlənməsinə əsaslanır. Bu texnika vasitəsilə birincili və ikincili antikor arasında qeyri-spesifik bağlanmanın qarşısı alınır və ikincil inkubasiya mərhələsi olmadığı üçün daha sürətli olur. Data keyfiyyəti də yaxşılaşdırılıb.
Şəkil 01: BrdU, NeuN və GFAP üçün ikiqat immunofluoressensiya ilə boyanma
Flüoroxromlar və ya flüoresan boyalar radiasiyanı, tercihen həyəcanlanan ultrabənövşəyi radiasiyanı uda bilən birləşmələrdir. Hissəciklər həyəcanlı vəziyyətdən əsas vəziyyətə çatdıqda, spektr yaratmaq üçün detektor tərəfindən tutulan və aşkar edilən radiasiya yayırlar. Floresan etiketinin müəyyən reaksiya üçün uyğun və sabit olması böyük əhəmiyyət kəsb edir və dəqiq nəticələr əldə etmək üçün onun antikorla düzgün birləşməsi lazımdır. Ən çox istifadə edilən flüoroxromlardan biri yaşıl rəngdə olan, müvafiq olaraq 490 nm və 520 nm udma və emissiya pik dalğa uzunluğuna malik fluorescein izotiosiyanatdır (FITC). IF-də istifadə edilən başqa bir agent olan rodamin qırmızı rəngdədir və 553 nm və 627 nm olan fərqli udma və emissiya pik dalğa uzunluğuna malikdir.
İmmunohistokimya (IHC) nədir?
IHC hədəf hüceyrədə antigenin varlığını müəyyən etmək və təsdiqləmək üçün tətbiq edilən molekulyar test üsuludur. Hədəf hüceyrə yoluxucu hissəcik, mikrob patogen və ya bədxassəli şiş hüceyrəsi ola bilər. IHC, hədəf hüceyrələrin hüceyrə səthində mövcud olan antigenlərin mövcudluğunu müəyyən etmək üçün monoklonal və poliklonal antikorlardan istifadə edir. Texnika antigen-antikor bağlanmasına əsaslanır. Xüsusi antigenin varlığını və ya olmamasını aşkar etmək üçün bu antikorlara aşkarlama markeri birləşdirilir. Bu markerlər fermentlər, flüoresanla işarələnmiş antikorlar və ya radio ilə işarələnmiş antikorlar kimi kimyəvi markerlər ola bilər.
Şəkil 02: İmmunohistokimya ilə boyanmış siçan-beyin dilimi
İHC-nin ən məşhur tətbiqi bədxassəli şişlərin varlığını müəyyən etmək üçün xərçəng hüceyrələrinin biologiyasındadır, lakin o, yoluxucu xəstəliklərin aşkarlanması üçün də istifadə olunur.
İmmunofluoressensiya və immunohistokimya arasında hansı oxşarlıqlar var?
- İmmunofluoressensiya və İmmunohistokimya in vitro şəraitdə baş verir.
- Hər iki texnika antigen-antikora əsaslanır
- Hər ikisi çox sürətli texnikadır.
- Texnikaların nəticələri təkrarlana bilir.
- Hər ikisi də məlumat keyfiyyətini artırıb.
- Bu üsullar xərçəng və yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur.
İmmunofluoressensiya ilə İmmunohistokimya Arasındakı Fərq Nədir?
İmmunofluoressensiyaya qarşı İmmunohistokimya |
|
| IF, analizdə istifadə edilən antikorların aşkarlanması üçün flüoresan boyalar və ya flüoresan zülallardan istifadə etməklə etiketləndiyi aşkarlama texnikasıdır. | IHC analizdə istifadə edilən antikorların aşkarlanması üçün kimyəvi maddələr və ya radioaktiv elementlərdən istifadə etməklə etiketləndiyi aşkarlama texnikasıdır. |
| Dəqiqlik | |
| İHC ilə müqayisədə IF texnikasında dəqiqlik daha yüksəkdir. | IHC-də dəqiqlik aşağıdır. |
| Spesifiklik | |
| ƏGƏR daha konkretdir. | IHC daha az spesifikdir. |
Xülasə – İmmunofluoressensiyaya qarşı İmmunohistokimya
Molekulyar mexanizmlər tibb sahəsində bir çox dəyişikliklərə səbəb olub, diaqnostika sahəsində inqilablar yaradan qabaqcıl molekulyar sınaq üsullarına səbəb olub. Bu ixtiralar xəstəliyin tez və dəqiq identifikasiyasına və təsdiqlənməsinə gətirib çıxarıb və bununla da dərmanların uğurla tətbiqi və istehsalına şərait yaradıb. Bu üsullardan dərmanların hədəflərini tapmaq və dərman mübadiləsi zamanı dərmanın farmakokinetik xüsusiyyətlərini təsdiqləmək üçün farmakologiyada da istifadə olunur. IF və IHC iki diaqnostik üsuldur, hər iki üsulda aşkarlanma üsulu fərqli olsa da, antigen və antikorların bağlanması konsepsiyasına əsaslanır. IF antigeni aşkar etmək üçün floresan prinsipindən istifadə edir və IHC antigeni aşkar etmək üçün kimyəvi birləşmə konsepsiyasından istifadə edir. Bu, IF və IHC arasındakı fərqdir.
İmmunofluoressensiyaya qarşı İmmunohistokimyanın PDF versiyasını endirin
Bu məqalənin PDF versiyasını yükləyə və sitat qeydinə əsasən onu oflayn məqsədlər üçün istifadə edə bilərsiniz. Zəhmət olmasa PDF versiyasını buradan yükləyin İmmunofluoressensiya və İmmunohistokimya Arasındakı Fərq.
