Birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, birbaşa immunofluoressensiya maraq hədəfinə qarşı işləyən tək antikordan istifadə edir, dolayı immunofluoressensiya isə maraq hədəfini etiketləmək üçün iki antikordan istifadə edir.
İmmunofluoressensiya və ya hüceyrə görüntüləməsi xüsusi bir hədəf antigeni flüoroforla etiketləmək üçün istifadə edilən bir texnikadır. Burada flüorofor, işığın həyəcanlanması zamanı işığı yenidən yaya bilən flüoresan kimyəvi birləşmədir. Flüorofor hədəf antigenlə bağlandıqda, nümunədə hədəf molekulu aşkar etməyə imkan verir. Daha ətraflı təsvir etmək üçün, bir antigen xüsusi bir antikorla bağlandıqda, flüoroforlarla birləşə bilər. Beləliklə, flüoresan mikroskop altında müşahidə edərkən nümunədə hədəf antigenin varlığını aşkar etmək asandır.
Bundan başqa, iki növ immunofluoressensiya var; birbaşa və dolayı immunofluoressensiya. Birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasındakı fərq əsasən istifadə olunan antikorların sayında və flüorofor birləşməsində olur. Yəni, birbaşa immunofluoressensiyada flüorofor birbaşa birincili antikorla, dolayı immunofluoressensiyada isə flüorofor ikincili antikorla birləşir.
Birbaşa İmmunofluoressensiya nədir?
İmmunofluoressensiya xüsusi hədəf antigenləri aşkar etmək üçün antikorlardan istifadə edir. Birbaşa immunofluoressensiya iki növ immunofluoressensiyadan biridir. Birbaşa immunofluoressensiyada tək antikor (ilkin antikor) iştirak edir və flüorofor birbaşa əsas antikorla birləşir. Antikoru hədəf antigenlə bağladıqdan sonra flüorofor flüoresan mikroskopla aşkarlana bilən flüoresans yayır.
Şəkil 01: Birbaşa İmmunofluoressensiya
Lakin birbaşa immunofluoressensiya bahalı üsuldur, çünki birincili birləşmiş antikorlar ikincili antikorlarla müqayisədə baha başa gəlir. Buna baxmayaraq, əlavə bir addım, yəni daha qısa bir texnika tələb etmir. Bundan əlavə, qeyri-spesifik bağlamalar birbaşa immunofluoressensiyada azalır. Beləliklə, növlərin çarpaz reaktivliyi aşağıdır. Lakin aşkarlama zamanı birbaşa immunoflüoresansın həssaslığı dolayı immunofluoressensiya ilə müqayisədə zəifdir.
Dolaylı İmmunofluoressensiya nədir?
Dolaylı immunofluoressensiya, hədəf antigenin etiketlənməsində birincili və ikincili antikorlar kimi iki növ antikoru əhatə edən ikinci immunofluoressensiya növüdür. Bu üsulda flüorofor ikincili antikorla birləşir. Beləliklə, bu texnika əlavə bir addımı əhatə edir.
Şəkil 02: İmmunofluoressensiya
Lakin bu üsulda həssaslıq yüksəkdir, çünki bir neçə flüorofor ikincili anticisimlərə birləşdirilə bilər və bu, aşkarlanmağı asanlaşdırır. Bundan əlavə, ikincili antikorların birləşməsinin daha ucuz və asan olması səbəbindən dolayı immunofluoressensiya daha ucuzdur. Birbaşa immunofluoressensiya ilə müqayisədə dolayı metodda növlər arası reaktivlik yüksəkdir.
Birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Bunlar iki növ immunofluoressensiya texnikasıdır.
- İlkin antikorlar və flüorofor hər iki üsulda iştirak edir.
- Həmçinin, antigen-antikor reaksiyası hər iki üsulda baş verir.
- Bundan başqa, həm birbaşa, həm də dolayı immunofluoressensiya antigenin aşkarlanması üçün flüoresan mikroskopdan istifadə edir.
Birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasındakı fərq nədir?
İmmunofluoressensiya istifadə olunan antikorlarla flüorofor birləşməsinə əsaslanaraq birbaşa və ya dolayı ola bilər. Birbaşa immunofluoressensiyada flüorofor bu texnikada iştirak edən tək antikor olan birincil antikorla birləşir. Bundan fərqli olaraq, dolayı immunofluoressensiyada flüorofor texnikada iştirak edən iki növ antikordan biri olan ikincil antikorla birləşir. Beləliklə, birbaşa və dolayı immunofluoresans arasındakı əsas fərq flüorofor ilə birləşən antikor növüdür.
Aşağıdakı infoqrafika birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasındakı fərqin yan-yana müqayisəsini təqdim edir.
Xülasə – Birbaşa və Dolayı İmmunofluoressensiya
İmmunofluoressensiya nümunədə spesifik antigenlərin varlığını aşkar etmək üçün istifadə edilən bir texnikadır. Bu texnika xüsusi antikorlardan istifadə edir. Buna görə də, bu vəziyyətdə antikorlar flüoresan mikroskopdan istifadə edərək onları aşkar etmək üçün flüoroforlarla birləşir. Üstəlik, iki növ immunofluoressensiya var, yəni birbaşa və dolayı immunofluoressensiya. Birbaşa immunofluoressensiyaya tək antikor və bu antikorla birbaşa birləşmiş flüorofor daxildir. Dolayı immunofluoressensiya iki antikor ehtiva edir; birincili və ikincili və flüorofor ikincili antikorla birləşir. Bir neçə ikincil anticisim birincili antikorla bağlana bildiyindən və bir neçə flüorofor ikincili anticisimlərlə birləşə bildiyindən dolayı immunofloressensiya birbaşa metoddan daha həssas üsuldur. Bundan əlavə, dolayı üsul birbaşa metoddan daha ucuzdur. Beləliklə, bu, birbaşa və dolayı immunofluoressensiya arasındakı fərqdir.
