Əsas Fərq – Birbaşa və Dolayı ELISA
Enzim immunoassay kimi də tanınan fermentlə əlaqəli immunoanaliz (ELISA) qanda antikorları aşkar edən seroloji testdir. Xəstənin müəyyən bir virus növü və ya başqa bir yoluxucu agentə (antigen) məruz qalıb-qalmadığını və orqanizmin infeksiyaya qarşı anticisimlər istehsal edib-etmədiyini öyrənmək üçün diaqnostika vasitəsi kimi istifadə olunur. ELISA keçmiş və indiki infeksiyaları da müəyyən edə bilər. Beləliklə, ELISA tez-tez xəstəliklərin dərin təhlilindən əvvəl həkimlər tərəfindən əvvəlcədən müayinə testi kimi istifadə olunur. Bu analiz laboratoriyada xəstədən qan nümunəsi götürülərək həyata keçirilə bilər. İki növ ELISA testi var: birbaşa ELISA və dolayı ELISA. Birbaşa və dolayı ELISA arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, dolayı ELISA daha həssasdır və ikincil antikorun əlavə edilməsini tələb edir, birbaşa ELISA isə daha az həssasdır və yalnız əsas antikordan istifadə edir.
Birbaşa ELISA nədir?
ELISA qanda xüsusi antigenlərin və ya antikorların mövcudluğunu müəyyən etmək üçün aparılan xəstəlik diaqnostik testidir. Plitə analizi kimi aparılır. Asanlıqla yoxlanılan fermentlərlə əlaqəli antikorlardan istifadə edir. Serum nümunəsində antigenlərin olması fermentlərlə əlaqəli spesifik antikorlarla bağlanır. Son mərhələdə fermentlə reaksiya vermək üçün xüsusi bir substrat əlavə edilir. Ferment substratı rəngli və ya siqnal istehsal edən məhsula çevirir. Kimyəvi substratda rəng dəyişikliyi serum nümunəsində müəyyən bir antikorun olduğunu göstərir. Birbaşa ELISA testi yalnız fermentlə əlaqəli əsas antikordan istifadə edir. Antigenə bağlandıqdan sonra, qanda infeksion agentin mövcudluğunu göstərən rəngini tez dəyişir. Bununla belə, birbaşa ELISA-da siqnalların intensivliyi daha zəifdir, çünki epitoplar antigenlərin bağlanması ilə məhdudlaşır. Beləliklə, birbaşa ELISA dolayı ELISA ilə müqayisədə daha az həssasdır.
Şəkil 01: Birbaşa ELISA Testi
Dolaylı ELISA nədir?
ELISA iki növ antikordan istifadə etməklə həyata keçirilə bilər, yəni; birincili antikor və ikincil antikor. Dolayı ELISA aləti daha yaxşı aşkar etmək üçün siqnalları gücləndirmək üçün hər iki növ antikordan istifadə edir. Dolayı ELISA texnikası aşağıdakı kimi həyata keçirilir.
- Plitələr antigenlərlə inkubasiya edilir və qeyri-spesifik bağlanmanın qarşısını almaq üçün yuyulur.
- Sonra əsas antikorlar əlavə edilir və yuyulur.
- Fermentlə əlaqəli ikincil antikor əlavə edilir və yuyulur.
- Substrat əlavə edilir və fermentlərlə reaksiyaya buraxılır.
- Siqnallar aşkar edilir və nümunədə spesifik antigenin olması və ya olmaması müəyyən edilir.
Dolaylı ELISA testində bir neçə ikincil antikor tək əsas antikora bağlana bilər. İkincil antikorlar asanlıqla yoxlanılan fermentlərlə əlaqələndirilir. Buna görə də, bir bağlama birdən çox qarşılıqlı əlaqə səbəbindən güclü bir siqnal verə bilər. Beləliklə, dolayı ELISA birbaşa ELISA-dan daha həssasdır. Bununla belə, dolayı ELISA ikincili antikorların çarpaz reaksiyaları səbəbindən qeyri-spesifik siqnallar yarada bilər.
Şəkil 02: Dolayı ELISA Testi
Birbaşa və dolayı ELISA arasındakı fərq nədir?
Birbaşa vs Dolayı ELISA |
|
| Birbaşa ELISA dolayı ELISA ilə müqayisədə daha az həssasdır. | Dolaylı ELISA daha həssasdır. |
| Alınan vaxt | |
| Birbaşa ELISA testi sürətli prosesdir. | Dolaylı ELISA çox vaxt aparır. |
| Antikorların istifadəsi | |
| Birbaşa ELISA-da yalnız bir növ antikor (İlkin antikorlar) istifadə olunur. | İlkin və ikincili antikorlar dolayı ELISA üçün istifadə olunur. |
| Fermentlərlə Əlaqə | |
| İlkin antikorlar fermentlərlə əlaqələndirilir. | İkinci dərəcəli antikorlar fermentlərlə əlaqələndirilir. |
| İkinci Anticisimlərin Çarpaz Reaktivliyi | |
| Birbaşa ELISA ikinci antikorların çarpaz reaktivliyini aradan qaldırır. | Dolaylı ELISA ikinci antikorların çarpaz reaktivliyindən təsirlənir. |
| Siqnallar | |
| Siqnallar dolayı ELISA ilə müqayisədə zəifdir. | Siqnallar dolayı ELISA-da gücləndirilir. Beləliklə, onu aşkar etmək asandır. |
Xülasə – Birbaşa və Dolayı ELISA
ELISA xəstənin qan nümunəsində antikor və ya antigenin mövcudluğunu aşkar etmək üçün əsasən immunologiyada istifadə edilən biokimyəvi üsuldur. Birbaşa və ya dolayı ELISA kimi tanınan iki proses vasitəsilə həyata keçirilə bilər. Birbaşa ELISA testi antigeni aşkar etmək üçün yalnız ilkin antikorlardan istifadə edir, dolayı ELISA isə həm birincili, həm də ikincil antikorlardan istifadə edir. Birbaşa ELISA-da birincili antikorlar, dolayı ELISA-da ikincil antikorlar etiketlənir. Bu, birbaşa və dolayı ELISA arasındakı fərqdir.
