Klenow və T4 DNT polimerazı arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, Klenow fraqmenti E. coli DNT polimeraza 1-in böyük fraqmenti, T4 DNT polimeraz isə T4 bakteriofaqının DNT polimeraz 1-dir.
DNT polimerazları əvvəlcədən mövcud olan primerin 3′-OH ucuna deoksiribonukleotidlər əlavə etməklə DNT-nin əmələ gəlməsini kataliz edən fermentlərdir. DNT polimerazalarının müxtəlif növləri var. Molekulyar biologiyada istifadə edilən DNT polimerazalarının əksəriyyəti prokaryotik DNT polimerazlardır. Klenow fraqmenti və T4 DNT polimerazı prokaryotik mənşəli iki növ DNT polimerazdır. Klenow fraqmenti E.-nin parçalanmasından əmələ gələn böyük fraqmentdir.coli DNT polimeraza 1 bakterial proteaz subtilisin tərəfindən iki fraqmentə bölünür. T4 DNT polimeraza T4 bakteriofaqının DNT polimeraz 1-dir. Həm Klenow, həm də T4 DNT polimerazı 5′→3′ polimeraza və 3′→5′ eksonükleaz aktivliyinə malikdir. Hər ikisinin 5′→3′ eksonükleaz aktivliyi yoxdur, bu da onları molekulyar biologiyada bir çox tətbiqlər üçün daha uyğun edir.
Klenow nədir?
Klenow fraqmenti molekulyar biologiyada faydalı olan DNT polimerazdır. E. coli DNT polimeraza 1 bakterial proteaz, subtilisin tərəfindən proteolitik həzm edildikdə, iki fraqmentlə nəticələnir: biri böyük fraqment, digəri isə kiçik fraqmentdir. Klenow fraqmenti 68 kDa ölçüsündə olan böyük fraqmentdir. Klenow fraqmenti DNT Pol I-in 5′→3′ polimeraza və 3′→5′ eksonukleaza (korrektor) fəaliyyətinə malikdir. Klenow fraqmentinin 3′→5′ eksonükleaza aktivliyi polimerləşmə irəlilədikcə səhv əlavə edilmiş əsasların çıxarılmasını asanlaşdırır. Klenow fraqmentində 5′→3′ eksonükleaz aktivliyi yoxdur, bu, tam uzunluqda və ya bütöv E.coli DNT polimeraza 1. Yalnız polimerləşmə aktivliyinə ehtiyac olduqda faydalıdır. Klenow fraqmentləri 5' çıxıntıları doldurmaq, zondların sintezi, DNT-nin ardıcıllaşdırılması, ikiqat zəncirli DNT-nin sintezi, cDNA ikinci zəncirinin sintezi və sahəyə yönəldilmiş mutagenez üçün istifadə olunur.
Şəkil 01: Klenow Fraqmenti
Müəyyən tətbiqlərdə Klenow fraqmentinin 3′→5′ eksonükleaz aktivliyi də arzuolunmaz olur. Klenow fraqmentini kodlayan genə mutasiya tətbiq etməklə onu aradan qaldırmaq olar. Yaranan Klenow fraqmenti ekzo-Klenow fraqmenti kimi tanınır. Buna görə də, ekzo-Klenow fraqmenti E. coli polimeraz 1-in yalnız 5′→3′ polimeraza aktivliyinə malikdir.
T4 DNT Polimeraz nədir?
T4 DNT polimeraza DNT sintezini kataliz edən DNT polimerazadır. Bakteriofaj T4 tərəfindən kodlanmış bir proteindir. Struktur olaraq, T4 DNT polimeraza 898 amin turşusu qalıq zülaldır (molekulyar çəkisi 103,6 kDa). Sintezi kataliz etmək üçün şablon və primer tələb olunur.
Şəkil 02: T4 DNT Polimeraz
Klenow fraqmentinə bənzər, T4 DNT polimerazı həm 5′→3′ polimeraza, həm də 3′→5′ eksonükleaza fəaliyyətinə malikdir. Üstəlik, 5′→3′ eksonükleaz aktivliyi də yoxdur. T4 DNT polimeraza DNT fraqmentlərinin 5′-çıxıntılı uclarının doldurulmasında faydalıdır. Həm də tez-tez iki zəncirli DNT-nin 5′-ucu və ya 3′-ucu ilə etiketlənməsi üçün istifadə olunur. T4 DNT polimeraza tez-tez küt klonlamada istifadə olunur. T4 DNT polimerazının 3′→5′ eksonükleaza (readreading) fəaliyyəti Klenow fraqmentindən daha güclüdür (200 dəfədən çox). Ən əsası, T4 DNT polimerazının yüksək emal qabiliyyəti var (saniyədə 400 nukleotid).
Klenow və T4 DNT Polimeraz arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Klenow və T4 DNT polimeraza iki prokaryotik polimerazadır.
- Hər iki polimeraza 5′→3′ polimeraza və 3′→5′ eksonükleaza aktivliyinə malikdir.
- Onlar 5′→3′ eksonükleaz aktivliyi nümayiş etdirmirlər.
- Hər iki ferment DNT sintezini kataliz etmək üçün şablon və primer tələb edir.
- Bu fermentlər 75-də istiliklə inaktivləşdirilə bilər 0
Klenow və T4 DNT Polimeraz Arasındakı Fərq Nədir?
Klenow və T4 DNT polimerazı arasındakı əsas fərq hər bir fermentin mənşəyidir. Klenow parçası bir bakteriyadan, T4 DNT polimeraza isə virus olan bakteriofaqdan əmələ gəlir. T4 DNT polimerazı Klenow fraqmentindən daha yüksək emal qabiliyyətinə malikdir. Üstəlik, T4 DNT polimerazı Klenow fraqmentindən daha güclü oxuma fəaliyyətinə malikdir. Beləliklə, bu, Klenow və T4 DNT polimerazı arasındakı başqa bir fərqdir.
Aşağıdakı info-qrafik cədvəl şəklində Klenow və T4 DNT polimerazı arasında daha çox fərqləri sadalayır.
Xülasə – Klenow vs T4 DNT Polimeraz
Klenow fraqmenti E. coli DNT polimeraza 1-in böyük fraqmentidir. O, yalnız 5′→3′ polimeraza və 3′→5′ eksonükleaza fəaliyyətinə malikdir. Onun bütöv E. coli DNT pol 1-in 5′→3′ eksonükleaza aktivliyi yoxdur. Buna görə də Klenow fraqmenti bakterial polimerazadır. Digər tərəfdən, T4 DNT polimeraza T4 bakteriofajı tərəfindən kodlanmış bir polimerazadır. Klenow fraqmentinə bənzər, o, həm 5′→3′ polimeraza, həm də 3′→5′ eksonükleaz aktivliklərini ehtiva edir və 5′→3′ eksonükleaza aktivliyinə malik deyil. Bununla belə, T4 DNT polimerazı Klenow fraqmentinə nisbətən yüksək emal qabiliyyətinə və yüksək oxuma aktivliyinə malikdir. Beləliklə, Klenow və T4 DNT polimerazı arasındakı əsas fərq budur.
