Klenow fraqmenti ilə DNT polimeraza 1 arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, Klenow fraqmenti DNT polimeraz 1-in böyük bir hissəsidir və 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza aktivliyi yoxdur, DNT polimeraza isə hər üçü olan E. coli fermentidir. 5′ - 3′ eksonükleaz aktivliyi daxil olmaqla domenlər.
DNT polimeraza canlı orqanizmlərdə DNT replikasiyasında iştirak edən əsas fermentlərdən biridir. Ölçüsünə və formasına görə eukariotlarda və prokaryotlarda DNT polimeraza fermentinin müxtəlif formaları mövcuddur. DNT polimeraza 1, 2 və 3 yalnız prokaryotik orqanizmlərdə olur və onlar DNT replikasiyasında müxtəlif rol oynayırlar. DNT polimeraza 1 5′-dən 3′-ə qədər polimeraza, 3′-dən 5′-ə qədər eksonükleaza aktivliyi və 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza aktivliyinə malik üç sahəyə malikdir. Klenow fraqmenti DNT polimeraza 1-in proteolitik məhsuludur. O, bütöv DNT polimeraza 1-in 5-3′ polimeraza və 3′-dən 5′-ə qədər eksonükleaza aktivliyinə malikdir, lakin 5′-dən 3′-ə qədər eksonükleaza aktivliyinə malik deyil.
Klenow Fragment nədir?
Klenow fraqmenti DNT polimeraza 1-in böyük bir hissəsidir. DNT polimeraza 1-dən fərqli olaraq, Klenow fraqmentində 5′-dən 3′-ə qədər olan eksonükleaza sahəsi olmadığından 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza aktivliyi görünmür. Klenow fraqmentləri DNT polimeraz 1-i zülal həzm edən bir ferment olan subtilisin adlı proteazla həzm etməklə istehsal olunur. Bəzi tətbiqlərdə Klenow fraqmentinin 3'-dən 5'ə qədər eksonükleaz aktivliyi arzuolunmaz olur. Klenow fraqmentini kodlayan gendə mutasiya tətbiq etməklə onu aradan qaldırmaq olar. Yalnız 5'-dən 3' polimeraza aktivliyinə malik olan nəticədə ferment ekzo-Klenow fraqmenti kimi tanınır. Morfoloji cəhətdən Klenow fraqmenti insanın sağ əlinə bənzəyir. O, təxminən 30 A ilə ayrılmış N-terminal 3′-5′ eksonükleaz domeninə və C-terminal polimeraza sahəsinə malikdir.
Şəkil 01: Klenow Fraqmenti və DNT Polimeraz 1
Klenow fraqmenti molekulyar bioloji texnikada mühüm vasitədir. Klenow fraqmentlərinin çoxlu istifadəsi var. Küt fraqmentlər yaratmaq üçün küt uçlu klonlamada son dərəcə vacibdirlər. Klenow fraqmentləri küt uçlar yaratmaq üçün 3′ çıxıntıları aradan qaldıra və ya 5′ çıxıntıları doldura bilər. Üstəlik, Klenow fraqmentləri tək zəncirlərdən ikiqat zəncirli DNT sintez etmək üçün istifadə olunur. Bundan əlavə, onlar 5'-3' DNT-dən asılı DNT polimeraz aktivliyindən istifadə edərək radioaktiv etiketli zondlar hazırlamaq üçün istifadə olunur.
DNT Polimerase 1 nədir?
DNT polimeraza 1 (Pol 1) bakterial DNT replikasiyası üçün lazım olan prokaryotlarda olan bir fermentdir. Bu, 1956-cı ildə Artur Kornberq tərəfindən kəşf edilmiş ilk DNT polimeraz növüdür. Pol 1 E. coli-də ən bol olan polimerazadır. PolA geni ilə kodlanır və 928 amin turşusundan ibarətdir. Üç domendən ibarətdir. Hər üç domen fərqli funksiyaları yerinə yetirir. İki domen 5′-dən 3′-ə qədər eksonükleaz aktivliyi və 3′-dən 5′-ə qədər eksonükleaz fəaliyyətini həyata keçirir. Pol 1-in malik olduğu bu fəaliyyətə görə, DNT-ni təkrarlayan fermentdən çox DNT təmir edən ferment kimi məşhurdur. Üçüncü domen şablon DNT-nin buraxılmasından və yeni DNT-ni dolduraraq və RNT primerlərini çıxararaq Okazaki fraqmentlərini birləşdirmədən əvvəl çoxsaylı polimerləşməni (5′-dən 3′-ə qədər) kataliz etmək qabiliyyətinə malikdir.
Şəkil 02: DNT Polimeraz
E Coli-dən təcrid olunmuş Pol 1 molekulyar tətbiqlərdə geniş şəkildə istifadə edilmişdir. Lakin Taq Polimeraz aşkar edildikdən sonra PCR texnologiyasında E Coli Pol 1-i əvəz etdi. Taq polimeraza Pol 1-ə aid bir növ termostabil DNT polimerazadır.
Klenow Fragment və DNT Polimerase 1 arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Klenow fraqmenti DNT polimeraza 1-in böyük bir hissəsidir.
- Onların 5'-3' DNT-dən asılı DNT polimeraz aktivliyi və 3'-5' eksonükleaza aktivliyi var ki, bu da yoxlanışa vasitəçilik edir.
- Onlar bir çox məqsədlər üçün istifadə olunur.
Klenow Fragment və DNT Polimerase 1 arasındakı fərq nədir?
Klenow fraqmenti ilə DNT polimeraza 1 arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, Klenow fraqmentində 5′-dən 3′-ə qədər eksonükleaza aktivliyi yoxdur, DNT polimeraza 1-də isə 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza aktivliyi var. Buna görə də, Klenow fraqmentinin iki domeni var, DNT polimeraza 1 isə hər üç sahəyə malikdir.
Aşağıdakı infoqrafika Klenow fraqmenti ilə DNT polimeraza 1 arasındakı fərqin daha ətraflı təfərrüatlarını göstərir.
Xülasə – Klenow Fragment vs DNT Polimerase 1
DNT polimeraza 1 E. coli fermentidir və 5′-dən 3′-ə qədər polimerləşmə sahəsi, 3′-dən 5′-ə qədər ekzonükleaza sahəsi və 5′-dən 3′-ə qədər eksonükleaza sahəsi kimi üç sahəyə malikdir. Klenow fraqmenti DNT polimerazının böyük bir hissəsidir. DNT polimeraza 1-in bir domeni yoxdur, bu da 5'-dən 3'-ə qədər olan ekzonükleaza sahəsidir. Klenow fraqmenti ilə DNT polimeraza 1 arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, Klenow fraqmentləri 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza sahəsinə malik deyil, DNT polimeraza 1-də isə 5′-dən 3′-ə qədər ekzonükleaza sahəsi var.
