Əsas Fərq – Phusion vs Taq Polimeraz
DNT polimerazları molekulyar biologiya texnikalarında geniş istifadə olunan fermentlərdir və təbii olaraq DNT replikasiyasına məruz qalan bütün orqanizmlərdə mövcuddur. Onlar replikasiya zamanı iştirak edən əsas polimerləşdirici fermentlərdir. DNT polimeraza DNT zəncirinin sərbəst 3' ucuna nukleotidlər əlavə etmək qabiliyyətinə malikdir və bununla da yeni zəncirinin uzanmasına səbəb olur. Hal-hazırda, xəstəliklərin diaqnostikasında və sənaye tətbiqlərində molekulyar biologiyanın inkişafı ilə əlaqədar olaraq, müxtəlif faydalı xüsusiyyətlərə malik polimerazaların istehsalı vacibdir. Bu, metodun dəqiqliyini artırır və onu daha sürətli bir texnika edir. Phusion və Taq polimeraza, xüsusi molekulyar tətbiqlərdə istifadə olunan iki kommersiya istehsalı olan termostabil polimeraza fermentləridir. Phusion Pyrococcus furiosus-dan təcrid olunmuş bir DNT polimerazdır və sədaqəti artırmaq üçün əsasən klonlaşdırma təcrübələrində istifadə olunur. Taq DNT Polimeraz Polimeraza Zəncirvari Reaksiyasında (PZR) istifadə edilən standart DNT polimerazadır və o, termostabil bakteriyadan təcrid olunub; Termus aquaticus. İki ferment arasındakı əsas fərq mənbə mikroorqanizmdir. Phusion ekstremofil Pyrococcus furiosusdan, Taq polimeraza isə termofil Thermus aquaticusdan təcrid olunub.
Phusion nədir?
Phusion DNT polimeraza ekstremofil arxeya olan Pyrococcus furiosus-dan fermenti təcrid etməklə istehsal olunan yeni polimerazadır. Bu mikroblar son dərəcə yüksək temperatur şəraitində yaşayır və bununla da polimerazı yüksək istilik davamlı polimeraza çevirir. Phusion polimeraza şərti termostabil polimeraza görə həddindən artıq sədaqət əldə etmək üçün istifadə olunur; Taq polimeraza. Phusion polimeraza genomik DNT-nin 7,5 kb-a qədər uzun şablonları gücləndirməyə qadirdir. Phusion polimerazının optimal polimerləşmə qabiliyyəti 720 C-dir. Phusion, həmçinin ardıcıllıq, ifadə analizi və mutasiya analizi üçün məhsulların klonlanmasında istifadə olunur.
Phusion DNT polimerazı 3' – 5' eksonükleaz aktivliyinə malikdir. Bu, sintezdən sonra yeni sintez edilmiş ipin yoxlanılmasına imkan verir. Beləliklə, nukleotid uyğunsuzluqları asanlıqla düzəldilir. Beləliklə, daha az səhv nisbətinə malikdir. Phusion polimerazının ümumi üstünlükləri bunlardır;
- Həddindən artıq sədaqət
- Yüksək Sürət və azaldılmış uzadılma vaxtı
- Sağlam Reaksiyalar və minimal optimallaşdırma tələb edir
- Yüksək Gəlir
Şəkil 01: Phusion
Phusion polimerazanın əsas çatışmazlığı onun deoksiuridin trifosfat (dUTP) iştirakı ilə inhibə edilməsidir. Reaksiya qarışığında dUTP-lər yığıldıqda, o, Phusion polimerazanın hərəkətlərini maneə törədə bilər. Bunun qarşısı fermenti əlavə etməzdən əvvəl reaksiya qarışığını dUTPase ilə müalicə etməklə alınır. Hazırda bu problemi həll etmək üçün Phusion polimeraz əvəzinə Pfu Turbo kimi tanınan Phusion polimerazanın dUTP-yə davamlı variantı istifadə olunur.
Taq Polimeraz nədir?
Taq DNT polimeraz ixtirası molekulyar biologiya sahəsində inqilab etdi. Bu, DNT amplifikasiyasında böyük bir problemi həll etdi. Taq DNT polimeraza termofil Thermus aquaticus bakteriyasından ekstraksiya edilmiş və təcrid olunmuş istiliyə davamlı polimeraza fermentidir. Bu fermentlərin kəşfi PCR-nin inkişafına səbəb olur. Bu ferment adi zəhmət tələb edən klonlaşdırma üsulları əvəzinə DNT-nin gücləndirilməsində polimeraza zəncirvari reaksiyasından istifadə etməyə imkan verdi. PCR indi molekulyar diaqnostika, kənd təsərrüfatı və sənaye sahələrində istifadə olunur və texnikaya bir çox yeni variasiya əlavə edilir.
Şəkil 02: Taq Polimeraz
Taq DNT polimerazı optimal temperatur intervalında 720C – 800C arasında işləyir. Taq DNT polimeraza ko-faktor tələb edir; funksiyası üçün maqnezium. Taq polimerazının 3' – 5' korrektə qabiliyyəti yoxdur, buna görə də Taq DNT polimerazının səhv nisbəti daha yeni DNT polimeraza növləri, məsələn, Phusion polimeraza və s. ilə müqayisədə yüksəkdir. Fermentin rahatlığı və elastikliyinə görə elm dünyasında eynidir.
Phusion və Taq polimeraza arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Həm Phusion, həm də Taq polimeraza fermentləri DNT zəncirinin 3' sərbəst ucuna nukleotidlər əlavə etməyə qadir olan polimerləşdirici fermentlərdir.
- Həm Phusion, həm də Taq polimerazaları polimerləşməni başlatmaq üçün primer ardıcıllığını tələb edir.
- Həm Phusion, həm də Taq polimerazaları istiliyə davamlıdır.
- Həm Phusion, həm də Taq polimerazaları DNT-ni gücləndirmək üçün PCR mexanizmlərində istifadə olunur.
- Reaksiya qarışığına polimeraza əlavə edərkən, fermentin effektivliyini təmin etmək üçün həm Phusion, həm də Taq polimerazaları ən son əlavə edilir.
- Həm Phusion, həm də Taq polimerazaları molekulyar biologiya eksperimental məqsədləri üçün kommersiya baxımından sintez edilir.
- Həm Phusion, həm də Taq polimerazaları funksiyasını tamamlamaq üçün kofaktor tələb edir.
Phusion və Taq Polimeraza Arasındakı Fərq Nədir?
Phusion vs Taq Polimeraz |
|
| Phusion Pyrococcus furiosus-dan təcrid olunmuş DNT polimerazasıdır və sədaqəti artırmaq üçün əsasən klonlaşdırma təcrübələrində istifadə olunur. | Taq DNT Polimeraz Polimeraza Zəncirvari Reaksiyasında (PZR) istifadə edilən standart DNT polimerazadır və o, termostabil bakteriya olan Thermus aquaticusdan təcrid olunub. |
| Mənbə Orqanizm | |
| Phusion ekstremofil arxeyadan - Pyrococcus furiosusdan çıxarılıb. | Bu ədəbi əsərlər müstəmləkəçilik dövründən müstəmləkəsizləşdirmə dövrünə qədərdir. |
| Düzgün oxuma bacarığı | |
| 3’ – 5’ sübut oxu qabiliyyəti Phusion-da mövcuddur. | 3’ – 5’ sübut oxuma qabiliyyəti Taq polimerazasında yoxdur. |
| Sadiqlik | |
| Phusion ilə yüksək dəqiqlik var. | Taq polimeraza aşağı dəqiqlik göstərir. |
| Gücləndirmə | |
| Phusion uzun DNT fraqmentlərini gücləndirməyə qadirdir. | Taq polimeraza daha qısa DNT fraqmentlərini gücləndirməyə qadirdir. |
| dUTP Zəhərlənməsi | |
| Phusion hərəkəti tək yığılma ilə maneə törədilir. | Taq polimeraza dUPT tərəfindən inhibə edilmir. |
Xülasə – Phusion vs Taq polimeraza
Phusion və Taq DNT polimeraza PCR texnikalarında istifadə olunan iki istiliyədavamlı polimerazadır. Phusion ekstremofil Pyrococcus furiosus-dan, Taq isə termostabil bakteriya Thermus aquaticusdan təcrid olunmuş bir polimerazadır. Taq DNT polimerazının kəşfi PCR ixtirasına gətirib çıxarır. Phusion Taq üzərində bir çox üstünlüklərə malikdir ki, bu da Phusionu yüksək sədaqətli DNT istehsalında daha yaxşı seçimə çevirdi. Bununla belə, Taq polimeraza hələ də PCR-də standart polimeraza fermenti kimi istifadə olunur. Bu, Phusion və Taq polimeraza arasındakı fərqdir.
