Əsas Fərq – Nitroselüloza vs PVDF
Western blotting zülal nümunəsindən spesifik zülalların aşkarlanması və kəmiyyətinin müəyyən edilməsinə imkan verən üsuldur. Texnikanın etibarlılığı geldən zülalların udulması üçün düzgün membranın seçilməsindən asılıdır. Mikroporoz membranların müxtəlif növləri var. Nitroselüloz və PVDF membranları, digər membran növlərinə nisbətən xüsusi atributlarına görə tədqiqatçılar tərəfindən üstünlük verilən iki belə membrandır. Nitroselüloz və ya PVDF arasında seçim də western blotlamada başqa bir problemdir. Həm nitroselüloz, həm də PVDF yüksək protein udma qabiliyyətinə malikdir. Nitroselüloz və PVDF membranı arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, nitroselüloz membranlar antikorları soymaq və antikorların reprobasiyası üçün membrandan təkrar istifadə etmək qabiliyyətinə malik deyil, PVDF membranları isə soymaq və təkrar istifadə etmək qabiliyyətinə malikdir.
Nitroselüloz nədir?
Nitroselüloz sellülozun nitrat turşusu ilə işlənməsi yolu ilə istehsal edilən polimerdir və molekulyar biologiyada mikroməsaməli membranların hazırlanmasında, xüsusilə cənub, şimal və qərb blotlama kimi ləkələmə üsulları üçün istifadə olunur. Nitroselüloz membranların məsamə ölçüləri 3 ilə 20 µm arasında dəyişir. Nitroselüloz mikroməsaməli membranlar membranın səthində baş verən immunokimyəvi reaksiyanın aşkarlanmasını asanlaşdırır. Buna görə də, nitroselüloz membranları tez-tez zülalların immobilizasiyası və western blotlamada xüsusi zülalların aşkarlanması üçün istifadə olunur. Nitroselüloz membranları həmçinin qlikoproteinləri və nuklein turşularını hərəkətsizləşdirə bilər.
Nitroselüloz membranlara bir sıra xüsusiyyətlərə görə yanal axın analizlərində üstünlük verilir. Nitroselüloz membranları yüksək konsentrasiyada zülalları udur. Membranı islatmaq üçün istifadə olunan həlledici nitroselüloz membran zülalının udulmasını az altmır. Nitroselüloz membranları asanlıqla istənilən gel ölçüsünə qədər kəsilə bilər və zülalları elektrik və ya kapilyar köçürmə ilə geldən membrana köçürür. Nitroselüloz yüksək bağlanma potensialı olan membran vasitəsilə zülalların daha sürətli axmasına imkan verir. Nitroselüloz yaxşılaşdırılmış idarəetmə gücünü göstərir. Nitroselüloz membranın digər xüsusi xüsusiyyəti onun müxtəlif plastik dayaqlara həlledici olmayan suya davamlı yapışdırıcılarla asanlıqla yapışdırıla bilməsidir.
Şəkil 01: western blotting üçün nitroselüloz membran
PVDF nədir?
Poliviniliden difluorid (PVDF) viniliden difloridin polimerləşməsi nəticəsində əldə edilən flüoropolimerdir və zülalların yüksək immobilizasiya qabiliyyətinə malikdir. Buna görə də, PVDF-dən hazırlanmış mikro gözenekli membranlar zülalların qarışıqlarından xüsusi zülalları təhlil etmək üçün western blot texnikalarında istifadə olunur. PVDF membranları amin turşularının analizi və zülalların ardıcıllığı üçün də istifadə edilə bilər. PVDF membranının nitroselüloz membran üzərindəki ən mühüm xüsusiyyəti onun antikorları asanlıqla soymaq və sonrakı antikor zondları üçün təkrar istifadə etməkdir.
PVDF membranları nitroselüloz membranlardan daha qalındır; deməli, təkrar istifadə zamanı zədələrə qarşı daha davamlıdır. PVDF membranları yüksək hidrofobikdir. Buna görə də, istifadə etməzdən əvvəl onlar metanol və ya izopropanolda isladılmalıdır.
Nitroselüloz və PVDF arasındakı fərq nədir?
Nitroselüloza vs PVDF |
|
| Nitroselüloza sellülozadan ibarət polimerdir. | PVDF viniliden difloridin polimerləşməsi nəticəsində əldə edilən flüoropolimerdir. |
| Membran Məsamə Ölçüsü | |
| Tipik məsamə ölçüləri 0.1, 0.2 və ya 0.45μ | Tipik məsamə ölçüləri 0.1, 0.2 və ya 0.45μm |
| Protein Bağlama Tutumu | |
| Nitroselülozun zülal bağlama qabiliyyəti 80-100 μg/sm2. | PVDF 170-200 μg/sm2 zülal bağlama qabiliyyətinə malikdir. |
| Həssaslıq | |
| Bu, PVDF ilə müqayisədə aşağı həssaslığa malikdir. | Bunun yüksək həssaslığı var. |
| Az ifadə olunan zülalların aşkarlanması | |
| Nitroselüloz membranlarında həssaslıq aşağı olduğundan, az ifadə olunan zülalların aşkarlanması üçün uyğun deyil. | Bu, yüksək həssaslığına görə az ifadə olunan zülalların aşkarlanması üçün daha uyğundur. |
| Fon Səs-küy | |
| Bunun daha az fon səsi var | Bunun daha yüksək fon səsi var. |
| Zülallarla qarşılıqlı əlaqə | |
| Protein molekulları hidrofobik qarşılıqlı təsirlər vasitəsilə nitroselüloz membranlarına bağlanır. | Proteinlər hidrofobik və dipol qarşılıqlı təsirləri vasitəsilə PVDF membranlarına bağlanır. |
| Membrananın təbiəti | |
| Nitroselüloz kövrək və kövrəkdir. Bununla belə, nitroselülozun versiyaları mövcuddur və onlar davamlıdırlar. | PVDF daha davamlıdır və daha yüksək kimyəvi müqavimətə malikdir. |
| Soymaq və təkrar istifadə etmək imkanı | |
| Nitroselüloz siqnalı itirmədən soymaq və yoxlamaqda çətinlik çəkə bilər. | PVDF tətbiqləri təkrar yoxlamaq və ardıcıllıq üçün idealdır. |
| Uyğunluq | |
| Nitroselüloz aşağı molekulyar ağırlıqlı zülalları aşkar etmək üçün idealdır. | PVDF yüksək molekulyar ağırlıqlı zülalları aşkar etmək üçün daha uyğundur. |
| Digər İstifadələr | |
| Nitroselüloz nuklein turşusu analizi və nöqtə/slot ləkəsi üçün istifadə edilə bilər. | PVDF zülal ardıcıllığı və bərk faza analiz sistemləri üçün istifadə edilə bilər. |
| Xərc | |
| Bu PVDF membranlardan daha ucuzdur. | Bu, nitroselüloz membranlardan daha bahalıdır. |
| Öncədən islatma ehtiyacı | |
| Nitroselüloz membranları metanol ilə əvvəlcədən islatmağı tələb etmir | PVDF membranları metanol ilə əvvəlcədən islatmağı tələb edir. |
Xülasə – Nitroselüloza vs PVDF
Nitroselüloz membranlar yanal axın analizi üçün ticari olaraq istifadə edilən ilk membranlar idi. Onların zülalları udmaq qabiliyyəti yüksəkdir. Buna görə nitroselüloz membranları western blotlamada istifadə olunur. PVDF, western blotlamada istifadə edilən başqa bir membran növüdür və o, həm də yüksək protein udma qabiliyyətinə malikdir. Hər iki növ protein analizi üçün western blotlamada istifadə olunur. Bununla belə, PVDF membranları daha çox xüsusi atributlara malikdir, bu da onları western blotting üçün nitroselüloz membranlardan daha uyğun edir. Lakin, nitroselüloz membranlar aşağı molekulyar ağırlıqlı zülalları, PVDF membranları isə yüksək molekulyar ağırlıqlı zülalları aşkar etmək üçün daha uyğundur. Bu, nitroselüloz və PVDF membranları arasındakı fərqdir.
