FPLC və HPLC əsas fərqi ondan ibarətdir ki, FPLC zülallar, nukleotidlər və peptidlər kimi böyük biomolekulları təmizləyən maye xromatoqrafiya növüdür, HPLC isə kiçik molekulyar ağırlıqlı birləşmələri ayıran maye xromatoqrafiya növüdür.
Maye xromatoqrafiya nümunəni ayrı-ayrı komponentlərə ayırmaq üçün istifadə edilən texnikadır. Bu ayrılma xüsusi nümunələrin mobil və stasionar fazalarla qarşılıqlı təsiri nəticəsində baş verir. Nümunədəki komponentlər maye xromatoqrafiyada hər bir komponentin mobil fazaya yaxınlığına əsasən ayrılır. Mobil faza və nümunə sütundan keçdikdə, nümunənin komponentləri UV-VIS spektroskopiyası ilə aşkar edilə bilən zolaqlara ayrılmağa başlayır. Buna görə də, FPLC və HPLC iki növ maye xromatoqrafiya texnikasıdır.
FPLC nədir?
FPLC zülallar, nukleotidlər və peptidlər kimi böyük biomolekulları təmizləyən maye xromatoqrafiya növüdür. Sürətli protein maye xromatoqrafiyası (FPLC) ilk dəfə 1982-ci ildə Pharmacia şirkəti tərəfindən İsveçdə işlənib hazırlanmış və bazara çıxarılmışdır. O, tez-tez zülal qarışıqlarını təhlil etmək və ya təmizləmək üçün istifadə olunur. Bu, hərəkət edən maye (mobil faza) və məsaməli bərk material (stasionar faza) üçün nümunə komponentlərinin yaxınlıq prinsipi əsasında baş verir. FPLC-də mobil faza buferdir, stasionar faza isə muncuqlardan ibarət qatrandır. O, adətən silindrik şüşə və ya plastik sütuna yığılmış çarpaz bağlı agarozadan ibarətdir.
Şəkil 01: FLPC (Sürətli Zülal Maye Xromatoqrafiyası) Aparatı
FLPC strategiyasının əksəriyyətində ion dəyişdirici qatran istifadə olunur. Buna görə də, maraq doğuran zülal bir yük qarşılıqlı əlaqəsi ilə qatranla bağlanacaqdır. FLPC texnikası həmçinin iki tampondan istifadə edir: bufer 1 (işləyən bufer) və bufer 2 (elüsyon buferi). Başlanğıcda, tampon və nümunə qarışığı sütundan keçərkən, qarışıqda maraq doğuran zülal yük qarşılıqlı əlaqəsi ilə qatranla bağlanacaq. Lakin maraq doğuran zülal dissosiasiyaya uğrayır və prosesin sonunda elüsyon tamponu sütundan keçəndə elüsyon buferindəki məhlula qayıdır. Daha sonra məhlul (maraqlanan zülal ehtiva edən eluant) duz konsentrasiyasını və zülal konsentrasiyasını ölçən iki detektordan keçir. Hər bir zülal təmizləndiyi üçün aşkarlama zamanı "pik" kimi görünür və sonrakı istifadə üçün toplana bilər.
HPLC nədir?
HPLC kiçik molekulyar ağırlıqdakı birləşmələri ayıran maye xromatoqrafiya növüdür. 1969-cu ildə ilk HPLC kommersiya olaraq ABŞ-ın Waters Corporation tərəfindən istehsal edilmişdir. Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyasında (HPLC) həlledicidə (mobil faza) nümunə qarışığı (analit) yüksək təzyiq altında xromatoqrafik qablaşdırma materialı (stasionar faza) olan bir sütundan pompalanır. Nümunə qarışığı helium və ya azotun hərəkət edən daşıyıcı qaz axını ilə aparılır.
Şəkil 02: HPLC (Yüksək Performanslı Maye Xromatoqrafiyası)
Nümunə qarışığının stasionar faza ilə ən az qarşılıqlı təsiri və ya mobil faza ilə ən çox qarşılıqlı təsiri olan komponentlər sütundan daha tez çıxacaq. Digər tərəfdən, stasionar faza ilə ən çox qarşılıqlı təsirə malik olan nümunə qarışığındakı komponentlər və ya mobil faza ilə ən az qarşılıqlı təsir göstərən komponentlər sütundan daha yavaş çıxacaqlar. Yuxarıda göstərilən qarşılıqlı təsir prinsipinə əsasən, nümunə qarışığının komponentləri ayrıla bilər. Bundan əlavə, alət detektoru sütundan çıxan nümunə qarışığının hər bir komponentini müəyyən edir. HPLC ətraf mühit və bioloji nümunələri dərmanlar, toksinlər və ya pestisidlər kimi məlum birləşmələrin olub-olmaması üçün yoxlamaq üçün istifadə olunur. Əczaçılıq, ətraf mühit, məhkəmə ekspertizası və kimya kimi müxtəlif sənayelərdə istifadə olunur.
FPLC və HPLC arasında hansı oxşarlıqlar var?
- FPLC və HPLC maye xromatoqrafiya növləridir.
- Hər ikisi bioloji nümunələri ayırmaq və müəyyən etmək üçün istifadə olunur.
- Onların maye mobil faza və bərk stasionar fazaları var.
- Hər iki üsul nümunədən keçmək üçün sütundan istifadə edir.
- Bu üsullar nümunənin ayrılması və aşkarlanması üçün nasoslar, detektorlar, klapanlar və proqram təminatından istifadə edir.
FPLC və HPLC arasındakı fərq nədir?
FPLC zülallar, nukleotidlər və peptidlər kimi böyük biomolekulları təmizləmək üçün istifadə edilən maye xromatoqrafiya növüdür. HPLC kiçik molekulyar ağırlıqlı birləşmələri ayırmaq üçün istifadə edilən maye xromatoqrafiya növüdür. Beləliklə, bu FPLC və HPLC arasındakı əsas fərqdir. Bundan əlavə, FPLC pH və keçiricilik monitorlarından, həmçinin fraksiya kollektorlarından istifadə edir. Əksinə, HPLC pH və keçiricilik monitorlarından və fraksiya kollektorlarından istifadə etmir.
Aşağıdakı infoqrafika cədvəl şəklində FPLC və HPLC arasında daha çox fərqi sadalayır.
Xülasə – FPLC vs HPLC
Xromatoqrafiya qarışıqdan komponentlərin ayrılması üçün istifadə edilən laboratoriya analitik texnikasıdır. O, sütun xromatoqrafiyası, qaz xromatoqrafiyası, maye xromatoqrafiyası, ion mübadiləsi xromatoqrafiyası və s. kimi bir neçə növə bölünür. FPLC və HPLC iki növ maye xromatoqrafiya texnikasıdır. FPLC zülallar, nukleotidlər və peptidlər kimi böyük biomolekulları təmizləmək üçün istifadə edilən maye xromatoqrafiya növüdür. Digər tərəfdən, HPLC kiçik molekulyar ağırlıqdakı birləşmələri ayırmaq üçün istifadə edilən bir maye xromatoqrafiya növüdür. Beləliklə, bu, FPLC və HPLC arasındakı fərqin xülasəsidir.
