RP HPLC və HIC arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, RP HPLC daha qütblü mobil faza və daha az qütblü stasionar fazadan istifadə edir. Halbuki, HIC hidrofobik stasionar fazadan istifadə edir ki, bu da hidrofobik molekulların ona yapışmasına imkan verir.
Xromatoqrafiya qarışığı komponentlərinə ayırmağa kömək edən analitik texnikadır. Əvvəlcə bir məhlulda ayrılacaq nümunəni həll etməliyik. Bu məhlul-maddə qarışığı mobil faza adlanır. Sonra mobil faza stasionar faza adlanan başqa bir materialdan keçir. Stasionar faza komponentlərin ayrılmasını müəyyən edir. Ayrılma materialın mobil faza ilə stasionar faza arasında bölünməsi səbəbindən baş verir.
RP HPLC nədir?
RP HPLC termini Əks Fazalı Yüksək Performanslı Maye Xromatoqrafiyası deməkdir. Hidrofobikliyə görə qarışıqda komponentlərin ayrılmasını nəzərdə tutur. Mobil fazadakı hidrofobik komponentlər stasionar fazada hərəkətsizləşdirilmiş hidrofobik liqandlarla əlaqə qurur, hidrofilik komponentlər isə stasionar fazanın səthinə yapışmadan stasionar fazadan keçir.
Şəkil 01: HPLC Aparatı
Üstəlik, bu metod digər xromatoqrafiya üsulları ilə müqayisədə daha çox təkrarlanma qabiliyyətinə malikdir və geniş tətbiq qabiliyyətini də göstərir. Buna görə də, biz bu metodu laboratoriyalarda bütün HPLC üsullarının 75%-dən çoxunda istifadə edirik. Çox vaxt biz mobil faza kimi qarışan qütb üzvi həlledici ilə sulu suyun qarışığından istifadə edirik. Beləliklə, məhluldakı hidrofobik komponentlərin stasionar fazanın səthinə yapışmasını təmin edəcək.
HIC nədir?
HIC termini Hidrofob Qarşılıqlı Xromatoqrafiya deməkdir. Bu, əks fazalı HPLC növüdür və bu üsul əsasən zülallar kimi böyük biomolekulların ayrılması üçün istifadə olunur. Bu üsulda biomolekulun nümunəsini hazırlamaq üçün sulu mühitdən istifadə etməliyik. Çünki üzvi həlledicilər zülalların denaturasiyasına səbəb ola bilər. Üstəlik, bu texnika stasionar fazanın bir qədər hidrofobik səthi olan böyük molekullar arasında qarşılıqlı təsirdən istifadə edir. Bundan əlavə, nümunədə yüksək duz konsentrasiyasından istifadə etməliyik, çünki bu, zülalın qablaşdırmada saxlanmasını təşviq edir; bu proses duzlama adlanır. Duz konsentrasiyasını tədricən az altmaqla biomolekulların hidrofobikliyinə görə ayrı-ayrılıqda ayrılmasını təmin edə bilərik.
Adətən, bu üsul ion mübadiləsi xromatoqrafiyasının əksinə olan şərtlərdən istifadə edir. Bu texnikada əvvəlcə nümunədə həll olunan maddənin həllini az altmaq üçün sütundan tampon məhlulunu keçirməliyik. Zülalın hidrofobik bölgələrini ifşa edir. Bununla belə, molekul daha hidrofobik olduqda, bağlanmanı təşviq etmək üçün daha az duz tələb olunur. Burada əvvəlcə daha az hidrofobik məhlullar, duz konsentrasiyasındakı dəyişikliyə uyğun olaraq isə daha çox hidrofobik məhlullar axırıncı elüsiya edilir.
RP HPLC və HIC arasındakı fərq nədir?
Xromatoqrafiya qarışıqda komponentlərin ayrılması üçün analitik texnikadır. RP HPLC və HIC iki xüsusi xromatoqrafik üsuldur. RP HPLC və HIC arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, RP HPLC daha qütblü mobil faza və daha az qütblü stasionar fazadan istifadə edir, HIC isə hidrofobik stasionar fazadan istifadə edir ki, bu da hidrofobik molekulların ona yapışmasına imkan verir.
Aşağıdakı infoqrafika RP HPLC və HIC arasındakı fərqi ümumiləşdirir.
Xülasə – RP HPLC və HIC
Xromatoqrafiya qarışıqda komponentlərin ayrılması üçün analitik texnikadır. RP HPLC və HIC iki xüsusi xromatoqrafik üsuldur. RP HPLC və HIC arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, RP HPLC daha qütblü mobil faza və daha az qütblü stasionar fazadan istifadə edir, HIC isə hidrofobik stasionar fazadan istifadə edir ki, bu da hidrofobik molekulların ona yapışmasına imkan verir.
