Əsas Fərq – Kağız və İncə Qat və Sütun Xromatoqrafiyası
Kağız xromatoqrafiyası, nazik təbəqə xromatoqrafiyası və sütun xromatoqrafiyası üç növ xromatoqrafiya üsuludur. Kağız xromatoqrafiyası, nazik təbəqə xromatoqrafiyası və sütun xromatoqrafiyası arasındakı əsas fərq xromatoqrafiya texnikasında istifadə olunan stasionar fazanın növünə əsaslanır. Kağız xromatoqrafiyası stasionar fazası kimi selüloz kağızından istifadə edir, Nazik Layer xromatoqrafiyası stasionar fazası kimi alüminium oksidi və ya silisium geldən istifadə edir, Sütun xromatoqrafiyası isə stasionar faza kimi uyğun matris materialı ilə dolu sütundan istifadə edir.
Zülallar və karbohidratlar kimi biomolekulların ayrılması və identifikasiyası prosesində xromatoqrafiya istifadə edilən mühüm biofiziki texnikadır. Xromatoqrafiya birləşmələri həll olma qabiliyyətinə, ölçüsünə və yükünə görə ayırır. Ayırma mexanizminə əsaslanaraq, xromatoqrafiya ion mübadiləsi, udma, bölmə və ölçüdən kənarlaşdırma kimi mexanizmlərdən istifadə edir və üç xromatoqrafiya üsulu mövcuddur; yəni kağız, nazik təbəqə və sütun xromatoqrafiyası. Kağız xromatoqrafiyası birləşmənin bərk-maye adsorbsiyasına və həll olunma qabiliyyətinə əsaslanır və stasionar faza kimi sellüloza kağızından istifadə edir. Nazik qat xromatoqrafiyası molekulların bərk-maye adsorbsiyasına əsaslanır. Adətən alüminium oksidi və ya silisium geldən hazırlanmış stasionar faza və həlledici olan mobil faza var. Sütun xromatoqrafiyası molekulları əsasən onların ölçüsünə, yaxınlığına və ya yükünə görə ayırmaq üçün istifadə edilən matrislə dolu sütundan istifadə edir.
Kağız Xromatoqrafiyası nədir?
Kağız xromatoqrafiyası istifadə edilən ən sadə xromatoqrafiya növüdür və geniş tədqiqat üçün istifadə edilmir. Əsasən tələbə laboratoriyalarında qarışıqlarda mövcud olan amin turşuları və karbohidratlar kimi biomolekulları müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Kağız xromatoqrafiyası sellüloz kağızı və ya Whatman filtr kağızı ilə hazırlanmış stasionar fazadan və adətən n-butanol və s. kimi üzvi həlledicilərdən istifadə etməklə hazırlanan mobil fazadan istifadə edir. Stasionar faza su ilə doyurulur və stasionar fazı maye edir. Beləliklə, birləşmələrin həll olunma qabiliyyətindən asılı olaraq, birləşmələr ləkələndikdə və hərəkətli fazanın mövcudluğunda işləməyə icazə verildikdə, onlar ayrılır. Beləliklə, xromatoqramın inkişafı ilə hər bir birləşmənin uzunluğunu müəyyən etmək üçün rəngləmə edilə bilər. Beləliklə, saxlama faktoru hesablana bilər.
Şəkil 01: Kağız Xromatoqrafiyası
Kağız xromatoqrafiyası daha çox işləyən həlledicinin istiqamətindən asılı olaraq artan kağız xromatoqrafiyası və enən kağız xromatoqrafiyası kimi təsnif edilə bilər.
Nazik qat xromatoqrafiyası nədir?
Nazik qat xromatoqrafiyası və ya TLC qarışıqda mövcud olan müxtəlif amin turşularını müəyyən etmək və ya zülalların identifikasiyası üçün çox istifadə edilən üsuldur. Ayırma texnikası bərk-maye adsorbsiyasına əsaslanır. Nazik təbəqənin xromatoqrafiyası zamanı stasionar faza kimi alüminium oksidi və ya silisiumdan hazırlanmış boşqab istifadə olunur. Solvent qarışığı tələbdən asılı olaraq dəyişir və həlledici hazırlamaq üçün n-butanol, sirkə turşusu və su kimi üzvi birləşmələrin müxtəlif birləşmələrindən istifadə edə bilər. Ayrılacaq birləşmələr boşqabda ləkələnir və həlledici qarışığa batırılır. Lövhənin verdiyi kapilyar təsir əsasında həlledici yuxarıya doğru hərəkət etdikdən sonra lövhədə ləkələnmiş birləşmələr də həlledicidə həll olmalarından asılı olaraq hərəkət edir.
Şəkil 02: Nazik Qat Xromatoqrafiyası
Xromatoqramma aparıldıqdan sonra ləkələrin aşkarlanması müxtəlif rəngləmə prosedurları ilə həyata keçirilir. Bəziləri ninhidrinlə boyanmadan istifadə edirlər ki, bu da kifayət qədər zəhərli boyanma üsuludur. Müasir nazik təbəqə xromatoqramları qaçışdan sonra xromatoqramı görmək üçün flüoresan üsullardan istifadə edir. Onun getdiyi məsafələrdən asılı olaraq hər bir birləşmənin saxlanma müddəti hesablana bilər. Bu, istifadə olunan qarışıq əsasında ayrılan birləşmənin növünü müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər. TLC əsasən zülal qarışığındakı amin turşularını müəyyən etmək və həmçinin qarışıqda mövcud olan müxtəlif növ monosaxaridləri ayırmaq üçün istifadə olunur.
Sütun Xromatoqrafiyası nədir?
Sütun xromatoqrafiyası sütun əsaslı ayırma metodundan istifadə edən bir çox xromatoqrafiya texnikasını təsvir etmək üçün istifadə edilən geniş termindir. Sütun xromatoqrafiyasında birləşmələri ayırmaq üçün qablaşdırma materialı ilə fiziki sütun istifadə olunur. Ayrılma birləşmələrin nümayiş etdirdiyi müxtəlif fiziki xüsusiyyətlərə əsaslana bilər. Bu xüsusiyyətlər yük, ölçü, 3D uyğunluq və bağlama qabiliyyəti və s. ola bilər. Beləliklə, matris materialı ilə dolu sütun stasionar faza, sütuna tətbiq olunan yuma tamponu isə mobil faza kimi çıxış edir.
Molekullar ölçüyə əsasən ayrılırsa, qablaşdırma materialı birləşmələrin keçməsi üçün məsamələr buraxacaq şəkildə qablaşdırılır. Beləliklə, məsamələrdən keçə bilməyən daha böyük molekullar əvvəlcə elüsyona məruz qalır, kiçik molekullar isə daha uzun müddət keçir.
Şəkil 03: Sütun Xromatoqrafiyası
Molekullar yüklərinə görə ayrılarsa, stasionar fazada birləşmələrin yüklərinə görə cəlb ediləcəyi anion və ya kation dəyişdiricisi olacaq. Beləliklə, yuyulma mərhələsi zamanı bağlanmayan birləşmələr süzüləcək. Elüsyon tamponu əlavə edildikdən sonra, bağlanmış yüklü birləşmələr elüt ediləcək. Bu elüentlərin aşkarlanması əsasən spektrofotometrik üsullara əsaslanır.
Kağızın nazik təbəqəsi ilə sütun xromatoqrafiyası arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Amin turşuları, zülallar və karbohidratlar kimi biomolekulların ayrılması üçün bütün nazik kağız təbəqəsi və sütun xromatoqrafiyası üç üsuldan istifadə olunur.
- Kağız Nazik Layer və Sütun Xromatoqrafiyası texnikaları mobil faza və stasionar fazaya malikdir.
- Kağız Nazik Layer və Sütun Xromatoqrafiyası üsulları ayırmaq üçün biofiziki mexanizmlərdən istifadə edir.
Kağızın nazik təbəqəsi ilə sütun xromatoqrafiyası arasındakı fərq nədir?
Kağız və İncə Qat vs Sütun Xromatoqrafiyası |
|
| Kağız Xromatoqrafiyası | Kağız xromatoqrafiyası birləşmənin maye-maye adsorbsiyasına və həll olunma qabiliyyətinə əsaslanaraq birləşmələri ayırmaq üçün istifadə edilən xromatoqrafik texnikadır. O, stasionar faza kimi sellüloz kağızından istifadə edir. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Nazik qat xromatoqrafiyası molekulların bərk-maye adsorbsiyasına əsaslanan başqa bir xromatoqrafik üsuldur. O, alüminium oksidi və ya silisium geldən hazırlanmış stasionar fazaya və mobil faza kimi həllediciyə malikdir, bu həlledicidir. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Sütun xromatoqrafiyası molekulları əsasən onların ölçüsünə, yaxınlığına və ya yükünə görə ayırmaq üçün istifadə edilən matrislə dolu sütundan istifadə edir. |
| Stasionar Faza | |
| Kağız Xromatoqrafiyası | Watman nitroselülozundan hazırlanmış kağız kağız xromatoqrafiyasında stasionar faza kimi istifadə olunur. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Alüminium oksidi və ya silisium gel nazik təbəqə xromatoqrafiyasının stasionar fazası kimi istifadə olunur. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Uyğun qablaşdırma materialı ilə qablaşdırılan sütun sütun xromatoqrafiyasında stasionar faza kimi istifadə olunur. |
| Mobil Faza | |
| Kağız Xromatoqrafiyası | Çalışan həlledici kağız xromatoqrafiyasının mobil mərhələsidir. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Çalışan həlledici nazik təbəqə xromatoqrafiyasının mobil mərhələsidir. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Yuma buferi sütun xromatoqrafiyasının mobil mərhələsidir. |
| Ayırma üçün istifadə olunan mexanizmlər | |
| Kağız Xromatoqrafiyası | Kağız xromatoqrafiyası bərk mayenin udulmasına əsaslanır. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Nazik qat xromatoqrafiyası bərk-mayenin udulmasına əsaslanır. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Sütun xromatoqrafiyası ölçü istisnası, yük və forma əsaslanır. |
| Elüsyon tamponu | |
| Kağız Xromatoqrafiyası | Kağız xromatoqrafiyası tələb olunmur. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Nazik qat xromatoqrafiyası üçün tələb olunmur. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Sütun xromatoqrafiyasında tələb olunur. |
| Aşkarlama | |
| Kağız Xromatoqrafiyası | Ləkələmə və Tutma əmsalını təyin etməklə. |
| Nazik Qat Xromatoqrafiyası | Ləkələmə və Tutma əmsalını təyin etməklə. |
| Sütun Xromatoqrafiyası | Spektrofotometrik təyin. |
Xülasə – İncə Kağız Qatı vs Sütun Xromatoqrafiyası
Kağız xromatoqrafiyası, TLC və sütun xromatoqrafiyası zülallar, amin turşuları və karbohidratlar (əsasən monosaxaridlər) kimi biomolekulları ayırmaq üçün istifadə edilən ayırma üsullarıdır. Kağız xromatoqrafiyası stasionar faza kimi selüloz kağızından istifadə edir və ayrılma mexanizmi bərk-maye adsorbsiyasına əsaslanır. TLC həmçinin bərk-maye adsorbsiya mexanizmlərindən istifadə edir. Molekullar hərəkətli fazada həll olmalarından asılı olaraq stasionar fazada ayrılır. Sütun xromatoqrafiyası ayırmaq üçün birləşmənin ölçüsü, forması, yükü və molekulyar çəkisi kimi fiziki xüsusiyyətlərdən istifadə edir. Matris materialı ilə dolu sütun stasionar faza, yuma tamponu isə həlledici fazası kimi çıxış edir. Bu, nazik kağız təbəqəsi ilə sütun xromatoqrafiyası arasındakı fərqdir.
