Əsas Fərq – T4 vs T7 DNT Liqası
DNT liqaza molekulyar biologiya texnikalarında istifadə edilən mühüm fermentdir. Nukleotidlər arasında fosfodiester bağları yaradaraq nukleotidləri birləşdirmək üçün molekulyar yapışqan kimi fəaliyyət göstərir. Fosfodiester bağları şəkər hissəsinin 3' hidroksil ucu ilə 5' son fosfat qrupu arasında əmələ gəlir. DNT liqazası geri qalan zəncirinin Okazaki fraqmentlərinə qoşulmaq üçün replikasiya prosesində və DNT təmir mexanizmləri və vektor genomuna maraq göstərən istənilən geni birləşdirmək üçün in vitro klonlaşdırma təcrübələri zamanı həyati əhəmiyyət kəsb edir. Hal-hazırda molekulyar bioloqlar tərəfindən istifadə edilən iki əsas DNT liqazı var: T4 və T7 DNT ligazaları. T4 DNT liqazası T4 bakteriofaqından təcrid olunan ilk fermentlərdən biridir. Daha kiçik bir protein olan T7 DNT liqazı T7 bakteriofaqından təcrid olunmuş fermentdir. Bu, T4 və T7 DNT liqazları arasındakı əsas fərqdir.
DNT liqazanın hərəkəti nədir?
DNT liqasiyası üç addımlı reaksiyada baş verir. İlk addım, AMP-nin lizinin terminal yan zəncir azotu ilə əlaqəli olduğu kovalent ferment-adenilat ara məhsulu yaradan ATP-nin alfa-fosforuna nukleofilik hücumdur. İkinci mərhələdə 5'-fosfatla bitən DNT substratı tərəfindən ferment-adenilatın fosforuna nukleofil hücum baş verir, lizin buraxır və DNT-adenilat əmələ gətirir. Son mərhələdə DNT-adenilat başqa bir DNT zəncirinin 3'- OH-si ilə hücuma məruz qalır, AMP-ni buraxır və polinükleotidlərə qoşulur.
T4 DNT Ligase nədir?
T4 Ligase Meselson, Weigle və Kellenberger tərəfindən təcrid edilmiş və müəyyən edilmiş ilk liqaz idi və istehsal edilən ilk kommersiya ligaz idi. T4 DNT ligaza fosfodiester bağının əmələ gəlməsini kataliz edən ATP-dən asılı bir fermentdir. Bu, 487 amin turşusu qalığı olan tək polipeptid zənciridir və molekulyar çəkisi təxminən 77 kDa-dır. Fəaliyyəti üçün optimal pH 7,5 – 8 aralığındadır.
Şəkil 01: T4 DNT liqaz
T4 DNT liqaza, adından da göründüyü kimi, T4 bakteriofaqında mövcuddur və E. coli ilə yoluxma zamanı fag ferment istehsal etdikdə təcrid edilmişdir. Ferment ikiqat zəncirli DNT duplekslərini küt uclarla bağlayır və birləşdiriləcək fraqmentlər bir-birinə yaxın olmalıdır.
T7 DNT Ligase nədir?
T7 liqaza T7 Bakteriofaq tərəfindən istehsal olunan 41 kDa proteindir və E. coli hüceyrələrini yoluxduraraq təcrid olunur. T7 liqazanın əsas funksiyası fosfodiester əlaqələri vasitəsilə DNT duplekslərini bağlamaq və klonlaşdırma təcrübələri zamanı yaxınlıqdakı DNT fraqmentlərini birləşdirməkdir. T7 DNT liqaz üçün optimal pH 7.0 – 7.2 aralığındadır. T7 liqaza ATP-dən asılıdır. T7 DNT ligazaları həmçinin DNT və RNT hibridlərini yumş altmağa qadirdir, transkripsiya zamanı anormal konformasiyalara səbəb olur; lakin bu fenomen hələ də in vitro tədqiqatlar tərəfindən araşdırılır.
T4 və T7 DNT liqazları arasında hansı oxşarlıqlar var?
- T4 və T7 DNT Ligase DNT fraqmentinin 3' OH ucu ilə 5' fosfat ucu arasında fosfodiester bağının formalaşması vasitəsilə DNT duplekslərini yumş altmaqla ligasiya reaksiyasında iştirak edir.
- Hər iki ferment bir-birinə yaxın olan küt uçlu DNT duplekslərini bağlayır.
- Hər iki ferment ATP-dən asılıdır.
- Bu fermentlər E.coli hüceyrələrini xüsusi bakteriofaqla yoluxdurmaqla təcrid olunurlar.
- Hər iki fermentin tətbiqinə aşağıdakılar daxildir:
- Molekulyar klonlaşdırma – maraqlı geni vektora bağlamaq üçün
- DNT təmiri – ikiqat zəncirləri təmir etmək üçün
- In vitro DNT replikasiyası
- Liqaza zəncirvari reaksiya
T4 və T7 DNT Ligaza Arasındakı Fərq Nədir?
T4 vs T7 DNT liqaz |
|
| T4 DNT DNT liqaz növü T4 bakteriofaqından təcrid olunmuş və fosfodiester bağının formalaşması vasitəsilə bitişik DNT fraqmentlərinin bağlanmasında iştirak edir. | T7 DNT liqaz növü bakteriofaq T7-dən təcrid olunmuş və fosfodiester bağının formalaşması vasitəsilə bitişik DNT fraqmentlərinin bağlanmasında iştirak edir. |
| Zülalın Ölçüsü | |
| T4 DNT liqazının ölçüsü 77 kDa-dır – T7 DNT liqaza ilə müqayisədə daha böyükdür. | T7 DNT liqazının ölçüsü 41 kDa-dır. |
| Optimal pH | |
| T4 DNT liqazını işləyən pH diapazonu 7,5 – 8,0-dır. | T7 DNT liqazı ilə işləyən pH diapazonu 7.0 – 7.2-dir. |
Xülasə – T4 vs T7 DNT Liqası
DNT ligazaları, maraq doğuran geni ehtiva edən rekombinant DNT molekullarını istehsal etmək üçün molekulyar klonlamada iştirak edən vacib fermentlər sinfidir. Liqasiya reaksiyası enerjidən istifadə edən reaksiyadır və mövcud ligazaları modulyasiya etməklə dəqiqliyi artırmaq üçün yeni tədqiqat işləri aparılır. T4 və T7 DNT ligazaları molekulyar bioloji texnikada istifadə olunan iki növ mühüm DNT liqaz fermentləridir. T7 DNT liqazası həm də T4 ilə yoluxmuş E. coli-dən təcrid olunmuş ilkin ligazaya əsaslanan tədqiqatın nəticəsidir. T7 daha kiçik ölçüsünə görə öz funksiyasını yerinə yetirməkdə daha səmərəli və dəqiq təsvir edilmişdir. Bu, T4 və T7 ligaz arasındakı fərqdir.
T4 vs T7 DNT Ligase-nin PDF Versiyasını endirin
Bu məqalənin PDF versiyasını yükləyə və sitat qeydlərinə uyğun olaraq onu oflayn məqsədlər üçün istifadə edə bilərsiniz. Lütfən, PDF versiyasını buradan yükləyin T4 və T7 Ligase Arasındakı Fərq.
