Əsas Fərq – YAC vs M13 Phage Vector
DNT klonlaşdırılması orqanizmlərin mühüm DNT fraqmentlərinin yayılmasını təmin edən mühüm prosesdir. Ev sahibi orqanizmə çevrilən rekombinant DNT yaratmaq üçün xüsusi DNT-nin vektor DNT ilə birləşməsini tələb edir. Bir vektor, yad genetik materialı başqa bir hüceyrəyə və ya orqanizmə daşımaq üçün bir vasitə kimi davranan bir DNT molekuludur. O, ev sahibi orqanizmin daxilində replikasiya edə və rekombinant DNT-nin çoxsaylı nüsxələrini istehsal edə bilməlidir. DNT klonlanmasında müxtəlif növ vektorlar istifadə olunur. Maya süni xromosomu (YAC) və M13 faq vektoru bunların arasında iki növdür. YAC və M13 faq vektoru arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, YAC maya hüceyrələrində təkrarlanan süni xromosomdur, M13 faq vektoru isə E Coli hüceyrələrində təkrarlanan M13 bakteriofaqının tək zəncirli dairəvi DNT-sidir.
YAC vektoru nədir?
YAC, yad DNT-nin böyük bir seqmentini daşımaq və maya hüceyrələrinin içərisində çoxalmaq qabiliyyətinə malik olan süni şəkildə qurulmuş xromosomdur. Replikasiya və sabitlik üçün vacib olan sentromer, telomer və avtonom şəkildə təkrarlanan ardıcıllıqlara malikdir. YAC həmçinin onu effektiv klonlaşdırma vektoru etmək üçün seçici marker və ya markerlər və məhdudlaşdırma saytları daşımalıdır. 1000 kb ilə 2000 kb arasında dəyişən böyük ardıcıllıqlar YAC-a daxil edilə və mayaya köçürülə bilər.
Şəkil 01: YAC Vector
M13 Phage Vector nədir?
Bacteriophage M13 E Coli-yə yoluxan və təkrarlanan virusdur. M13 bakteriofaqının genomu kiçik ölçülüdür, təxminən 6,7 kb. Bu, tək zəncirli, dairəvi və müsbət mənada DNT-dir. Bu virus xüsusi olaraq E Coli bakteriyasını F pilus vasitəsilə yoluxdurur. Bakteriyaya ssDNT-yə daxil olduqdan sonra özünün tamamlayıcı zəncirini sintez edir və dsDNA və ya M13-ün replikativ formasına (RF) çevrilir. RF ev sahibi orqanizmdə plazmid kimi davrana bilər. DsDNT E Coli içərisində çoxalır və yeni faqlar daşıyan ssDNA istehsal edir. Bu yeni faqlar ev sahibi hüceyrəni öldürmədən davamlı olaraq E Coli-dən sərbəst buraxılır. Bununla belə, infeksiya E Coli-nin böyüməsini ləngidir. dsDNA bakteriya hüceyrələrindən çıxarıla və DNT klonlanmasında vektor kimi istifadə edilə bilər. Onlar M13 faj vektorları kimi tanınırlar. Onlar asanlıqla manipulyasiya edilə və plazmid vektorlarına bənzər şəkildə istifadə edilə bilər.
Bu M13 faqlarının yoluxma qabiliyyəti, gen klonlamasında vektor kimi istifadə etmək üçün yaxşı bir keyfiyyət kimi xidmət edir. M13-ü vektora çevirərkən onun genomuna bir neçə element daxil edilməlidir. Bunlar, lac repressor (lac I) zülalı üçün bir gen, lac Z geninin operator-proksimal bölgəsi, lak promotoru və çoxlu klonlama yeridir (polilinker). M13-ün dsDNT-si vektor kimi istifadə edildikdə, ona plazmid vektoru kimi baxıla bilər. Bununla belə, ssDNA M13-dən istifadə DNT ardıcıllığı və sahəyə yönəldilmiş mutagenezdə üstünlüklərə malikdir.
M13 faq vektoru lacZ bölgəsində çoxsaylı klonlama yeri daşıdığından, rekombinasiya edilmiş vektorlar IPTG və X-Gal olan agar lövhələrində mavi/ağ koloniya skrininqi ilə asanlıqla müəyyən edilə bilər. Plitələrdə əmələ gələn mavi lövhələrdə rekombinasiya olunmuş faqlar yoxdur. Buna görə də, əlavələri olan faqlar klonlaşdırma məqsədi ilə seçilə bilər.
Şəkil 02: Bakteriofaq M13
YAC və M13 Phage Vector arasındakı fərq nədir?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC, yad DNT-nin böyük bir seqmentini daşımaq və maya hüceyrələrinin içərisində çoxalmaq qabiliyyətinə malik olan genetik cəhətdən yaradılmış xromosomdur. | M13 faq vektoru E Coli-yə yad DNT daxil etmək üçün istifadə edilən M13 bakteriofaqı tərəfindən hazırlanmış viral vektordur. |
| Məqsəd | |
| YAC-lar genomik DNT-nin böyük fraqmentlərini mayaya klonlaşdırmaq üçün hazırlanmışdır. | M13 faq vektorları E Coli-yə yad DNT daxil etmək üçün istifadə olunur. |
| Daxiletmə Uzunluğu | |
| YAC-larda meqabaza ölçülü genomik əlavələr ola bilər (1000 kb – 2000 kb). | Əlavələrin ölçüsü təxminən 1500 bps-dir. |
| Tikinti | |
| YAC DNT-ni bütöv şəkildə təmizləmək çətindir və YAC vektor sistemi yaratmaq üçün yüksək konsentrasiya tələb olunur. | Tiklik fotosintetik elektron zənciri vasitəsilə baş verir. |
| Sabitlik | |
| YAC qeyri-sabitdir. | M13 faqları asanlıqla çıxarıla bilər. |
| Ölçü | |
| Fermentlər daha böyük molekullardır. | M13 faqları YAC-dan stabildir. |
Xülasə – YAC vs M13 Phage Vector
YAC maya hüceyrələrinə genetik materialın böyük seqmentlərini daxil etmək üçün maya xromosomunun xüsusi bölgəsindən istifadə edərək süni şəkildə qurulmuş vektor sistemidir. M13 fag vektoru, ev sahibi orqanizm kimi E coli-dən istifadə edən M 13 bakteriofaqından əldə edilən vektor sistemidir. Bu YAC və M13 Phage Vector arasındakı əsas fərqdir. Hər ikisi rekombinant DNT texnologiyası və gen klonlanmasında eyni dərəcədə faydalıdır.
