BL21 və DH5 Alpha arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, BL21, əsasən protein ifadəsi üçün istifadə edilən proteaz çatışmazlığı olan, genetik cəhətdən dəyişdirilmiş səlahiyyətli E. coli hüceyrəsidir, DH5 Alpha isə, ilk növbədə istifadə edilən recA1 mutasiyası ilə genetik olaraq hazırlanmış səlahiyyətli E. coli hüceyrəsidir. plazmid çevrilməsi üçün.
E. coli rekombinant protein istehsalı üçün seçilən məşhur orqanizmlərdən biridir. Bu illər ərzində ən populyar ifadə platformasına çevrildi. Hüceyrə fabriki kimi də istifadə olunur. BL21 və DH5 Alpha, hal-hazırda müvafiq olaraq zülal ifadəsi və plazmid transformasiyası üçün istifadə edilən iki genetik mühəndislik E. coli hüceyrəsidir.
BL21 nədir?
BL21, əsasən protein ifadəsi üçün istifadə edilən proteaz çatışmazlığı olan, genetik cəhətdən hazırlanmış səlahiyyətli E.coli hüceyrəsidir. E. coli BL21 B ştamından əldə edilən bakteriya hüceyrəsidir. Onun Lon proteaz və ompT xarici membran proteazının qüsurları var. O, adətən rekombinant zülal ifadəsi üçün istifadə olunur, çünki normal olaraq ifadə olunan zülallara sabitlik gətirir. BL21 pCold I-IV DNT və pCold TF DNT ilə protein ifadəsi üçün faydalıdır. Lakin bu səlahiyyətli E. coli hüceyrəsi pET sistemi kimi T7 promotorundan istifadə edən bir protein ifadə sistemi üçün nəzərdə tutulmamışdır. Bunun səbəbi BL21-in T7 RNT polimerazını ifadə etməməsidir. Bundan əlavə, plazmidin qurulması və ya hazırlanması üçün istifadə edilməsi tövsiyə edilmir, çünki onda recA mutasiyası yoxdur.
Şəkil 01: BL21
BL21 ilk dəfə 1986-cı ildə Studier tərəfindən B xəttinin müxtəlif modifikasiyalarından sonra təsvir edilmişdir. BL21 hüceyrələrində bir çox xarici zülalları parçalayan LON proteazı çatışmazlığı var. Bundan əlavə, funksiyası hüceyrədənkənar zülalları parçalamaq olan xarici membran proteazını (OmpT) kodlayan başqa bir gen yoxdur. Bu zülalların çatışmazlığı E. coli BL21 hüceyrələrində yad zülalın uğurlu istehsalını tetikler. Bundan əlavə, bu hüceyrələrdəki hsdSB mutasiyası BL21 hüceyrələrində yad DNT metilasiyası və pozulmasının qarşısını alır.
DH5 Alpha nədir?
DH5 Alpha, ilk növbədə plazmid transformasiyası üçün istifadə edilən recA1 mutasiyasına malik genetik cəhətdən hazırlanmış səlahiyyətli E. coli hüceyrəsidir. DH5 Alpha E. coli hüceyrələri transformasiyanın səmərəliliyini maksimuma çatdırmaq üçün amerikalı bioloq Duqlas Hanahan tərəfindən genetik olaraq hazırlanmışdır. DH5 Alfa hüceyrəsində üç fərqli mutasiya var: recA1, endA1 və lacZΔM15. recA1 qlisin 160-ı və recA polipeptidində aspartik turşu qalığını əvəz edən tək nöqtəli mutasiyadır. Bu mutasiya rekombinazların fəaliyyətini dayandırır və homoloji rekombinasiyanı inaktivləşdirir. endA1 mutasiyası hüceyrədaxili endonükleazanı təsirsiz hala gətirir ki, bu da onun daxil edilmiş plazmidin deqradasiyasına mane olur.
Şəkil 02: DH5 Alpha
Bundan başqa, lacZΔM15 mutasiyası transformasiya edilmiş hüceyrələrin mavi-ağ skrininqinə imkan verir. Bu hüceyrələr səlahiyyətli hüceyrələrdir. İstənilən plazmidi daxil etmək üçün onlar tez-tez kalsium xlorid çevrilməsi ilə istifadə olunur. Son tədqiqatlar nəticəsində müəyyən edilmişdir ki, Hanahan metodu ilə DH5 Alpha hüceyrəsi plazmid transformasiyası üçün ən səmərəli səlahiyyətli hüceyrədir.
BL21 və DH5 Alpha arasında hansı oxşarlıqlar var?
- BL21 və DH5 Alpha iki genetik mühəndislik E.coli
- Hər ikisi səlahiyyətli hüceyrələrdir.
- Onlar fərqli mutasiyalardan ibarətdir.
- Hər ikisinin təbii yaşayış yeri yoxdur.
- Bunlar ekspressiya tədqiqatları və klonlaşdırma prosedurları kimi laboratoriya məqsədləri üçün istifadə olunur.
BL21 və DH5 Alpha Arasındakı Fərq Nədir?
BL21 əsasən protein ifadəsi üçün istifadə edilən proteaz çatışmazlığı olan, genetik cəhətdən hazırlanmış səlahiyyətli E. coli hüceyrəsidir. Digər tərəfdən, DH5 Alpha, əsasən plazmid transformasiyası üçün istifadə edilən recA1 mutasiyası ilə genetik cəhətdən yaradılmış səlahiyyətli E. coli hüceyrəsidir. Beləliklə, bu BL21 və DH5 Alpha arasındakı əsas fərqdir. Bundan əlavə, BL21 E. coli hüceyrəsində recA1 mutasiyası yoxdur, DH5 Alpha E. coli hüceyrəsində isə recA1 mutasiyası var.
Aşağıdakı infoqrafika BL21 və DH5 Alpha arasındakı fərqləri cədvəl şəklində sadalayır.
Xülasə – BL21 vs DH5 Alpha
E. coli-nin qeyri-patogen ştammları genetik olaraq alimlər tərəfindən laboratoriya ekspressiya tədqiqatları və klonlaşdırma məqsədləri üçün hazırlanmışdır. BL21 və DH5 Alpha iki genetik mühəndislik E. coli hüceyrəsidir. BL21 əsasən protein ifadəsi tədqiqatları üçün istifadə olunur. Digər tərəfdən, DH5 Alpha əsasən plazmid çevrilmə məqsədləri üçün istifadə olunur. Beləliklə, bu, BL21 və DH5 Alpha arasındakı fərqin xülasəsidir.
