Rəqabətli və qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı əsas fərq ondan ibarətdir ki, rəqabətli ELISA inhibisyon antigenindən istifadə edir, qeyri-rəqabətli ELISA isə analiz üçün inhibə antigenindən istifadə etmir.
Fermentlə Bağlı İmmunosorbent Təhlili (ELISA) antikorlar, antigenlər, zülallar və qlikoproteinlər kimi müxtəlif hədəfləri aşkarlayan immunoloji analizdir. Bu, yerinə yetirmək üçün sürətli və sadə bir üsuldur. Beləliklə, daha çox tədqiqat və diaqnostik məqsədlər üçün istifadə olunur. ELISA fermentlərin istifadəsini və antikor və antigenin spesifik bağlanmasını əhatə edir. Reaksiyaların necə baş verdiyinə əsasən, dörd növ ELISA var: birbaşa ELISA, dolayı ELISA, sendviç ELISA və inhibe ELISA. Birbaşa, dolayı və sendviç ELISA rəqabətsiz ELISA növləridir, inhibe ELISA isə tamamlayıcı ELISA növüdür. Bu məqalənin əsas məqsədi rəqabətli və qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı fərqi müzakirə etməkdir.
Rəqabətli ELISA nədir?
Rəqabətli ELISA siqnal müdaxiləsinin aşkarlanması vasitəsilə nümunədə antigen konsentrasiyasını ölçür. Burada analiz bir inhibitor antigendən istifadə edir. Beləliklə, ELISA inhibisyonunun bir növüdür. Bu prosedur zamanı nümunədə mövcud olan antigenlər müəyyən miqdarda etiketlənmiş antikora bağlanmaq üçün seçilmiş istinad antigeni ilə rəqabət aparır. Bundan əlavə, bu prosedur nümunənin inkubasiyası, etiketlənmiş antikorun artıq miqdarı ilə başlayır. Həmçinin, istinad antigeni çoxlu quyu analiz lövhəsində əvvəlcədən örtülməlidir. Sonra nümunə qarışığı istinad antigeni olan analiz lövhəsinə əlavə edilməlidir. Pulsuz antikorlar nümunədəki antigenin miqdarından asılı olaraq istinad antigeninə bağlanacaq. Beləliklə, daha çox nümunə antigen varsa, daha az istinad antigeni aşkar ediləcək. Beləliklə, o, daha zəif siqnal yaradır.
Şəkil 01: ELISA
Bunun əksinə, nümunədə daha az miqdarda antigen olduqda, getdikcə daha çox istinad antigeni antikorları tutacaq və güclü siqnal verəcək. Nümunə az miqdarda antigen ehtiva etdikdə rəqabətli ELISA daha güclü siqnal verdiyi üçün rəqabətli ELISA hətta az sayda antigen olan nümunələr üçün də çox həssas analizdir.
Bəzi rəqabət qabiliyyətli ELISA dəstlərində etiketli antikor əvəzinə etiketli antigen istifadə olunur. Burada etiketlənmiş antigen və nümunə antigen əsas antikora bağlanmaq üçün yarışacaq. Eynilə, nümunədəki antigenin miqdarı az olduqda, antikorlara bağlanan etiketli antigenin miqdarı daha yüksək olacaq və daha güclü bir siqnal yaradacaqdır.
Qeyri-rəqabətli ELISA nədir?
Dörd növ ELISA arasında üç növ rəqabətsiz ELISA-dır. Bunlar birbaşa ELISA, dolayı ELISA və sendviç ELISA. Hər üç format metodologiyalarında cüzi fərqlərlə ümumi ELISA prinsipi altında işləyir.
Direct ELISA, etiketli əsas antikor olan fermentdən istifadə edir. Beləliklə, ikincil antikor tələb etmir. Buna görə birbaşa ELISA digər ELISA növlərindən daha sürətlidir. Birincil antikor, lövhədə mövcud olan immobilizasiya edilmiş hədəf antigenə birbaşa bağlanacaq. Beləliklə, ferment-substrat reaksiyası baş verəcək və görünən siqnal yaranacaq.
Şəkil 02: Sandviç ELISA
Birbaşa ELISA-dan fərqli olaraq, dolayı ELISA etiketlənməmiş ilkin antikordan və ikincil antikorla işarələnmiş fermentdən istifadə edir. Birincil antikor immobilizasiya edilmiş antigenə bağlandıqdan sonra ikincil antikor birincil antikorla bağlanır. İkincil antikordakı ferment antigenlə reaksiya verəcək və görünən bir siqnal verəcəkdir. Sandviç ELISA həm birbaşa, həm də dolayı ELISA-dan fərqlidir. Burada antikor analiz lövhəsinin divarına immobilizasiya edilir.
Rəqabətli və Rəqabətsiz ELISA arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Rəqabətli və rəqabətsiz ELISA iki növ immunosorbent analiz texnikasıdır.
- Onlar yüksək çevik və həssas texnikalardır.
- Bundan başqa, həm rəqabətli, həm də qeyri-rəqabətli ELISA fermentlə əlaqəli immunoanalizlərdir.
- Həmçinin, hər iki üsul ferment-substrat reaksiyasına görə siqnal yaradır.
Rəqabətli və Qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı fərq nədir?
Rəqabətli ELISA məhdud miqdarda spesifik antikor üçün analit antigeni ilə etiketli antigen arasında tamamlamaya əsaslanan bir ELISA növüdür. Digər tərəfdən, rəqabətsiz ELISA-da maraq doğuran antigenlə istinad antigen arasında belə rəqabət yoxdur. Beləliklə, bu rəqabətli və rəqabətsiz ELISA arasındakı əsas fərqdir. Eynilə, rəqabətli ELISA inhibisyon ELISA-dır, rəqabətsiz ELISA isə inhibe ELISA deyil. Beləliklə, bu həm də rəqabətli və rəqabətsiz ELISA arasındakı fərqdir.
Bundan başqa, rəqabətli ELISA maraq doğuran aşağı miqdarda antigeni ölçmək üçün daha uyğundur. Həssas bir üsuldur. Digər tərəfdən, rəqabət qabiliyyəti olmayan ELISA nümunədə mövcud olan antigenlərin sayından asılı deyil. Buna görə də, bu həm də rəqabətli və qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı fərqdir.
Aşağıda infoqrafika rəqabətli və qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı fərqi müqayisəli şəkildə izah edir.
Xülasə – Rəqabətli və Qeyri-rəqabətli ELISA
Rəqabətli və rəqabətsiz ELISA ELISA və ya fermentlə əlaqəli immunosorbent analizlərinin iki əsas növüdür. Rəqabətli və qeyri-rəqabətli ELISA arasındakı fərqi ümumiləşdirərkən, rəqabətli ELISA maraq antigeni ilə istinad antigeni arasında məhdud miqdarda antikorlara qarşı rəqabətə əsaslanır. Buna görə rəqabətli ELISA da inhibe ELISA adlanır. Digər tərəfdən, rəqabətsiz ELISA hədəf antigenləri və istinad antigenləri arasındakı rəqabətə etibar etmir. Maraqlanan analitə qarşı etiketli spesifik antikordan artıq istifadə edir. Beləliklə, bu rəqabətli və rəqabətsiz ELISA arasındakı əsas fərqdir. Birbaşa ELISA, dolayı ELISA və sendviç ELISA rəqabətsiz ELISA-nın üç əsas növüdür.
