Əsas Fərq – İrəli və Ters Astar
Polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) Molekulyar Bioloji tətbiqlərdə istifadə olunan DNT gücləndirmə üsuludur. Xüsusilə maraqlı olan DNT ardıcıllığının milyonlarla milyardlarla nüsxəsini çıxaran çox istifadə edilən bir texnikadır. Laboratoriyalarda həyata keçirilən in vitro üsuldur. PCR texnikası tamamilə Taq polimeraza adlı kommersiya istehsalı DNT polimerazından asılıdır. Həm də bir sıra digər komponentlər və düzgün temperatur saxlanması tələb olunur. Əhəmiyyətli bir komponent primerlərdir. Primerlər hədəf DNT ardıcıllığı üçün xüsusi olaraq hazırlanmış qısa DNT ardıcıllıqlarıdır. Onların uzunluğu adətən təxminən 20 nukleotiddir. Taq polimeraza nukleotidlərin əvvəlcədən mövcud olan nukleotid ardıcıllığına əlavə edilməsini katalizləyir. Beləliklə, primerlər yeni tellərin sintezinin başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edir. Taq polimeraza yalnız 5' - 3' istiqamətdə işləyir, buna görə də DNT sintezi eyni 5' - 3' istiqamətdə baş verir. DNT ikiqat zəncirli olduğundan, PCR-də iki növ primer lazımdır. Onlar irəli primer və tərs astar kimi tanınır. İrəli və tərs primerlər DNT sintezi baş verdikdə DNT-də primerin uzanma istiqamətinə əsasən adlandırılır. İrəli primer antisens DNT zəncirlə bağlanır və genin + və zəncirinin 5'-dən 3' istiqamətinə sintezini başlatır. Ters primer sensual zəncirlə bağlanır və kodlaşdırma zəncirinin tamamlayıcı zəncirinin sintezinə başlayır; Bu, genin zəncirinin 5'-dən 3'ə qədər olmasıdır. Bu, irəli və tərs primerlər arasında əsas fərqdir.
İrəli Astar nədir?
İrəli oriyentasiya bir genin kodlama zolağının və ya hiss zəncirinin sintezidir. Taq polimeraza 5'-dən 3' istiqamətində yeni bir ipin sintezini katalizləyir. Kodlama zəncirinin sintezi, primer kodlanmayan və ya antisens zəncirlə bağlandıqda baş verir və 5'-dən 3' istiqamətində uzanır.
Şəkil 01: İrəli və Ters Astarlar
Antisens zəncirlə və ya kodlanmayan zəncirlə və ya şablon zəncirlə bağlanan primer irəli primer kimi tanınır, çünki irəli primer kodlaşdırma və ya genin müsbət zəncirinin sintezi üçün başlanğıc nöqtəsi kimi çıxış edir. İrəli primer antisens zəncirinin 3' yan ucunu tamamlayan qısa bir nukleotid ardıcıllığına malikdir. O, antisens zəncirlə hibridləşir və şablon zəncirinə tamamlayıcı olan nukleotidləri əlavə etmək üçün Taq polimerazını asanlaşdırır.
Ters astar nədir?
Ters primer hiss zəncirinin 3' ucu və ya kodlaşdırma zolağı ilə bağlanan qısa DNT ardıcıllığıdır. Əks primer kodlaşdırma ardıcıllığının və ya kodlanmayan ardıcıllığın tamamlayıcı zəncirini sintez etmək üçün başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edir. Ters astar kodlaşdırma telinin 3' ucuna əlavə olaraq hazırlanmışdır. Beləliklə, o, kodlaşdırma zəncirinin yan tərəfindəki 3' ucu ilə yumşalır və Taq polimeraza antisens ipi və ya şablon ipi sintez etməyə imkan verir. Orientasiyası tərsinə olduğundan, bu astar tərs astar kimi etiketlənir.
Həm tərs, həm də irəli primerlər DNT-nin hədəflənmiş və ya maraqlanan xüsusi bölgələrinin milyonlarla milyardlarla nüsxələrinin istehsalı üçün vacibdir.
İrəli və tərs astar arasında hansı oxşarlıqlar var?
- Həm İrəli, həm də tərs primerlər oliqonukleotidlərdən hazırlanır.
- Həm İrəli, həm də Ters Primerlər DNT cüt zəncirlərinin yan uclarını tamamlayan qısa nukleotid ardıcıllığına malikdir.
- Həm İrəli, həm də Əks primerlər adətən 20 nukleotiddən ibarətdir.
- Həm İrəli, həm də Ters Astarlar polimeraza zəncirvari reaksiyalarında istifadə olunur.
- Həm İrəli, həm də Ters Astarlar kommersiya məqsədilə sintez edilir.
- Həm İrəli, həm də Geriyə çəkilən primerlər temperaturda sabitdir və adətən oxşar Tm-ə malikdirlər.
- Həm İrəli, həm də Ters Primerlər hədəf DNT ardıcıllığı ilə tavlanır.
- Həm İrəli, həm də Ters Astarlar PCR reaksiyalarına uyğun olaraq hazırlanmışdır.
- Həm İrəli, həm də Ters Primerlər DNT gücləndirilməsi üçün başlanğıc nöqtələri kimi xidmət edir.
- Həm tərs, həm də irəli primerlər hədəflənmiş və ya maraqlı DNT ardıcıllığının müəyyən bölgələrinin milyon nüsxəsinin istehsalı üçün vacibdir.
İrəli və tərs astar arasındakı fərq nədir?
İrəli Astar vs Geri Astar |
|
| İrəli primer kodlaşdırılmayanın 3' ucu və ya genin şablon zolağı ilə hibridləşən və kodlaşdırma ardıcıllığının sintezi üçün başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edən qısa DNT ardıcıllığıdır. | Ters primer kodlaşdırmanın 3' ucu və ya şablon olmayan zəncirlə hibridləşən və kodlaşdırılmayan ardıcıllığın sintezi üçün başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edən qısa DNT ardıcıllığıdır. |
| Qızartma Strand | |
| Şablon zəncirlə irəli primer qızartmalar. | Şablon olmayan zəncirlə tərs primer yumşaldın. |
| Nəticədə Yeni Ardıcıllıq | |
| İrəli primer kodlaşdırma ardıcıllığının sintezini asanlaşdırır. | Ters primer kodlaşdırılmayan ardıcıllığın sintezini asanlaşdırır. |
Xülasə – İrəli və Ters Astar
PZR texnikasında iki növ primer iştirak edir. Onlar irəli və tərs primerlərdir. Yeni DNT zəncirinin sintezində primerin uzanmasına əsaslanaraq, bu primerlər etiketlənir və ya adlandırılır. Taq polimeraza yeni DNT-ni 5'-3' oriyentasiyada sintez edir. Beləliklə, astarlar ikiqat iplərin 3' uclarına əlavə olaraq hazırlanmışdır. 5'-dən 3' istiqamətə uzanan irəli primer antisensin 3' ucu və ya şablon və ya kodlanmayan ardıcıllıqla hibridləşir. Kodlaşdırma ardıcıllığını sintez etmək üçün başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edir. 5'-dən 3' istiqamətə uzanan tərs primer kodlaşdırmanın 3' ucu və ya şablon olmayan və ya hiss zəncirinin ucu ilə hibridləşir. Kodlanmayan ardıcıllığın sintezi üçün başlanğıc nöqtəsi kimi xidmət edir. Bu, irəli və tərs astar arasındakı fərqdir.
